| Dithiothreitol | |
|---|---|
| Všeobecné | |
| Systematický název |
( 2S,3S )-1,4-bis(sulfanyl)butan-2,3-diol |
| Chem. vzorec | C4H10O2S2 _ _ _ _ _ _ _ |
| Fyzikální vlastnosti | |
| Stát | bílá pevná látka |
| Molární hmotnost | 154,253 g/ mol |
| Tepelné vlastnosti | |
| Teplota | |
| • tání | 42-43 °C |
| • varu | 125-130 °C |
| Klasifikace | |
| Reg. Číslo CAS | 3483-12-3 |
| PubChem | 446094 |
| Reg. číslo EINECS | 222-468-7 |
| ÚSMĚVY | C([C@H]([C@@H](CS)O)O)S |
| InChI | InChI=1S/C4H10O2S2/c5-3(1-7)4(6)2-8/h3-8H,1-2H2/t3-,4-/m1/s1VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N |
| CHEBI | 42170 |
| ChemSpider | 393541 |
| Údaje jsou založeny na standardních podmínkách (25 °C, 100 kPa), pokud není uvedeno jinak. | |
| Mediální soubory na Wikimedia Commons | |
Dithiothreitol (dithiothreit, DTT, anglicky DTT ) je nízkomolekulární redukční činidlo, známé také jako Clelandovo činidlo . Název molekuly pochází ze čtyřuhlíkového cukru – threose .
Dithiothreitol je velmi silné redukční činidlo schopné vytvořit šestičlenný kruh vytvořením intramolekulární disulfidové vazby . Při pH 7 má redukční potenciál -0,33 V. Redukce disulfidových vazeb se provádí dvěma po sobě jdoucími thiol-disulfidovými výměnami (viz níže). Meziprodukt je nestabilní, protože druhá thiolová skupina má tendenci uzavřít kruh a tvořit oxidovaný DTT s tvorbou dvou redukovaných disulfidových vazeb. DTT vykazuje redukční aktivitu pouze při pH kolem 7, protože pouze záporně nabitý thiolát může tvořit aktivní -S- , zatímco protonovaná thiolová forma -SH je neaktivní. Konstanta kyselosti thiolové skupiny leží mezi hodnotami pH od 9,2 do 10,1.
Dithiothreitol se používá k "deprotekci" thiolované DNA. Koncový atom thiolované DNA v roztoku má tendenci tvořit dimery , zvláště v přítomnosti kyslíku . Dimerizace značně snižuje účinnost následných vazebných reakcí, jako je tomu v případě imobilizace DNA na zlatě v biosenzorech . Typicky se DTT smíchá s roztokem DNA a nechá se reagovat, poté se DTT odstraní filtrací nebo chromatografií . Odstranění DTT se nazývá odsolování.
Dithiothreitol se v biochemii často používá k obnově disulfidových vazeb v molekulách proteinů a zejména intramolekulárních a intermolekulárních vazeb mezi cysteinovými zbytky . DTT však nemůže redukovat disulfidové vazby, které jsou hluboko ve struktuře proteinu (nejsou v kontaktu s rozpouštědlem), takže redukce SS vazeb se často provádí za denaturačních podmínek (například zahřátím nebo v přítomnosti silného denaturační činidlo 6 M guanidin hydrochlorid , 8 M močovina nebo 1 % dodecylsulfát sodný ). A v souladu s tím může být přítomnost disulfidových vazeb na povrchu proteinu zkoumána jejich redukcí v přítomnosti DTT.
DTT se také používá jako oxidační činidlo. Výhodou DTT je, že netvoří smíšené disulfidové vazby, což se liší od glutathionu . Ve velmi vzácných případech může DTT tvořit adukty, například dva atomy síry mohou tvořit disulfidové vazby s jinými atomy síry; v takových případech DTT nemůže cyklizovat.
DTT se snadno oxiduje vzdušným kyslíkem, a proto je relativně nestabilní chemickou sloučeninou. Protože protonované atomy síry jsou méně nukleofilní , je DTT slabší redukční činidlo při kyselém pH .