Benedictovo činidlo je řešením pro kvalitativní a kvantitativní stanovení redukujících sacharidů ve vzorku. Jeho působení je založeno na redoxní reakci mezi aldehydovými skupinami cukrů a ionty Cu 2+ v alkalickém prostředí. V tomto případě se kationty mědi redukují na oxid měďnatý Cu 2 O, který se z roztoku vysráží ve formě červené sraženiny.
Činidlo lze připravit přidáním roztoku 17,3 g síranu měďnatého ve 150 ml vody k roztoku 100 g bezvodého uhličitanu sodného a 173 g citrátu sodného v 850 ml vody. Výsledný roztok lze skladovat ve skleněné nenatřené nádobě pod vlivem světla nebo tepla. Experimentálně bylo prokázáno, že zahřívání takového roztoku ve vodní lázni po dobu 24 hodin nezhoršuje jeho vlastnosti, zatímco zahřívání Fehlingova činidla po dobu 3 hodin vede ke znatelnému vysrážení oxidu měďnatého [1] .
Citrát sodný v této směsi slouží jako komplexotvorné činidlo , které udržuje kationty mědi v roztoku v alkalickém prostředí vytvořeném uhličitanem sodným [1] .
Benedictovo činidlo spolu s Fehlingovým a Tollensovým činidlem se používá k detekci redukujících cukrů ( aldóza a ketóza ), které jsou jako takové klasifikovány právě pozitivní reakcí s těmito činidly. Na rozdíl od neredukujících cukrů, mezi které patří glykosidy, obsahují redukující cukry volnou aldehydovou skupinu nebo ji mohou tvořit v důsledku izomerizace v alkalickém prostředí [2] .
Metoda navržená Benedictem spočívá v zahřátí 5 ml činidla s nejvýše 8 kapkami moči, v jejímž vzorku má být stanoven cukr. Během experimentu se oxidují aldehydové skupiny a redukují se kationty mědi. Benediktovo činidlo má tendenci tvořit hydratované oxidy, takže reakční produkt nemá vždy červenou barvu: může být také žlutý nebo zelený. Pokud je obsah cukru nízký, pak se sraženina tvoří až při ochlazení. Pokud nejsou přítomny žádné redukující cukry, zůstává roztok čirý. Roztoky s obsahem cukru 0,08 % dávají znatelný pozitivní výsledek, zatímco pro Fehlingovo činidlo je tato hodnota 0,12 % [1] .