Mikrobiologické rozbory půd - rozbory půd , prováděné za účelem zjištění přítomnosti bakterií v půdě, jejich druhů a počtu.
Vzorky půdy by měly být odebírány pomocí jader o průměru asi 10 mm do hloubky 10-20 cm, je lepší jádra předem sterilizovat ve vroucí vodě (100 ° C).
Vzorky by měly být umístěny do sterilních Petriho misek , které by pak měly být uzavřeny. ½ hmotnosti každého vzorku se obvykle odebere na chemický rozbor (studium koncentrace iontů obsahujících dusík), zbytek jde na mikrobiologický rozbor.
Mikrobiologická aktivita půd může být určena proteázovou aktivitou půdních mikroorganismů a proteázová aktivita půd je určena aktivitou exoenzymů půdních mikroorganismů a závisí na jejich počtu a aktivitě. Exoenzymy jsou enzymy vylučované mikroorganismy do vnějšího prostředí, které štěpí bílkoviny, polysacharidy a lipidy.
Do Petriho misek se vzorky půdy musíte umístit osvětlený fotografický film nakrájený na 2-3 rámečky, předem namočený ve vodě po dobu 10 minut. Voda by měla být předem sterilizována varem po dobu 10 minut (100 °C). Je také lepší umístit jeden fragment filmu do prázdné sterilní Petriho misky (kontrola), aby bylo možné porovnat získané výsledky s kontrolou na konci experimentu a minimalizovat riziko chyb.
Dále se vzorky půdy musí uchovávat při pokojové teplotě (20 °C) po dobu 9 dnů. Poté by měl být film opatrně odstraněn a omyt pod tekoucí vodou a poté vysušen. Poté musíte vypočítat procento "snědené" emulzní vrstvy na paletě. Čím vyšší je procento destrukce emulzní vrstvy, tím vyšší je exoenzymatická aktivita půdy.
Charakteristickým rysem Gramova barvení je nestejný poměr různých mikrobů k barvivům trifenylmethanové skupiny: genciánová violeť, methylová violeť , krystalová violeť. Mikroby patřící do grampozitivní skupiny dávají silné spojení s uvedenými barvivy a jódem . Obarvené mikroby se působením alkoholu nezbarvují , v důsledku čehož při dodatečném barvení fuchsinem grampozitivní mikrobi nemění původně přijatou fialovou barvu. Gramnegativní mikroorganismy tvoří s genciánovou, krystalickou nebo methyl violeti a jódem sloučeninu, která se snadno ničí působením alkoholu, v důsledku čehož se odbarvují a poté se barví fuchsinem a získávají červenou barvu. Poměr mikroorganismů k barvení podle Grama má velkou diagnostickou hodnotu.
Malé množství vzorku půdy by mělo být naočkováno do Petriho misek s řasovým agarem pomocí mikrobiologické smyčky, poté by měly být naočkované Petriho misky uchovávány při pokojové teplotě po dobu 9 dnů. Je také lepší provést kontrolní očkování ze vzduchu, aby bylo možné později porovnat kolonie mikroorganismů pěstovaných v různých Petriho miskách a zjistit, které mikroorganismy by mohly pocházet ze vzduchu a ne z půdy.
Kápněte kapku destilované vody na čisté podložní sklíčko bez tuku, poté přidejte malé množství mikrobiální kultury vypěstované na agaru pomocí mikrobiologické kličky. Dále musíte udělat tahy a opravit je na plameni. Je lepší udělat 2-3 nátěry pro každý vzorek půdy a jeden kontrolní nátěr.
Gramovo barvení mikroorganismů by mělo být provedeno následovně:
Výsledek barvení: grampozitivní bakterie jsou obarveny hlavním barvivem v tmavě fialové barvě, gramnegativní bakterie, které vnímají další barvu, získávají jasně karmínovou barvu.