Barvení podle Romanovského-Giemsy
Aktuální verze stránky ještě nebyla zkontrolována zkušenými přispěvateli a může se výrazně lišit od verze recenzované 15. července 2019; kontroly vyžadují 2 úpravy .Barvení podle Romanovského - Giemsy je cytologická metoda pro barvení mikroorganismů , buněčných struktur a tkání různých typů (včetně krve ) pro vyšetření světelnou mikroskopií . Navrhl v roce 1904 [1] Gustav Giemsa . V autorské verzi je název barviva „Giemsasche Lösung für die Romanowsky Färbung“ (Giemsův roztok pro barvení podle Romanovského) [2] . Barví acidofilní útvary v různých odstínech červené, bazofilní útvary v barvách od fialové po modrou.
Příprava barviva
Před barvením nátěrů se hotové tekuté barvivo zředí rychlostí 1-2 kapky barviva na 1 ml destilované vody. Nátěry se barví po dobu 20-25 minut při 37 °C ve vlhké komoře (uzavřená Petriho miska s navlhčeným filtrem na dně). Po obarvení se stěry promyjí v tekoucí vodě, vysuší na vzduchu a zkoumají olejovou imerzí.
Barvicí směs Romanovsky-Giemsa, která je založena na barvě Romanovsky-Wright , ve formě prášku (komerční barvivo) se rozpustí ve směsi stejných objemů metylalkoholu a glycerinu (800 mg barviva na 100 ml rozpouštědla ). Barvivo se špatně rozpouští, takže je lepší jej rozemlít rozpouštědlem v množství 300 mg na 100 ml a poté za míchání přidávat barvivo, dokud se nedosáhne požadované koncentrace. Příprava barviva často trvá několik dní. Jako rozpouštědla je důležité používat chemicky čistý metylalkohol a glycerin, protože nečistoty zhoršují vlastnosti barviva. Místo metylalkoholu lze použít 100% etylalkohol. Připravená barvicí směs se skladuje na chladném suchém místě v těsně uzavřené nádobě.
Speciální standardní řešení Giemsa
- Složení barviva:
Technika barvení
- Nátěry fixované v metylalkoholu barvíme roztokem (1 ml hotové tekuté barvy + 2 ml základního tlumivého roztoku + 47 ml destilované vody) po dobu 40-120 minut (doba barvení se volí empiricky). Používá se fosfátový pufr, ale pH pufru závisí na typu nátěru: pro nátěr z kostní dřeně - 5,8-6,0, pro krevní nátěr - 6,4-6,5, pro detekci prvoků - 6,8, malarické plazmodium - 7, 0-7,2.
- Opláchněte v destilované vodě, osušte a zkontrolujte ponořením.
Výsledek vybarvení
Bakterie se barví fialově červeně, buněčná cytoplazma modře, jádra červeně. Při barvení prvoků se jejich cytoplazma zmodrá a jádra zčervená fialová.
Výsledky barvení krevního nátěru
- cytoplazma lymfocytů se barví modře, jejich jádra - v barvách od intenzivní fialové až po fialovou;
- cytoplazma monocytů je zbarvena zakalenou modrošedou barvou, jejich jádra - ve světlejší purpurově červené, jemné azurofilní zrnitosti;
- granule bazofilů jsou zbarveny v intenzivní modrofialové barvě;
- granule eozinofilů se barví oranžově růžově;
- granule neutrofilů jsou zbarveny v barvách od fialové po fialovou;
- jádra leukocytů jsou purpurově červené barvy s dobře viditelnou strukturou chromatinu; jadérka jsou dobře rozlišitelná;
- granulomery krevních destiček zbarvené červeně, hyalomery zbarvené modře;
- růžová barva hemoglobinu .
Viz také
Poznámky
- ↑ Giemsa G. Eine Vereinfachung und Vervollkommnung meiner Methylenazur-Methylenblau-Eosin-Färbemethode zur Erzielung der Romanowsky-Nochtschen Chromatinfärbung. (německy) // Centralbl f Bakt etc: magazín. - 1904. - Bd. 37 . - S. 308-311 .
- ↑ Bezrukov A. V. Barvení podle Romanovského: k otázce priority / Ke 120. výročí objevení Romanovského efektu. - 12 s (nedostupný odkaz)
 Slovníky a encyklopedie |
|
|---|