Fixace (histologie)

Fixace je zpracování vzorku určeného pro mikroskopii tak, aby byly pokud možno zachovány jejich struktury v nezměněném stavu [1] . V opačném případě působením vlastních enzymů, působením hnilobných organismů a z jiných důvodů se vzorek stává pro výzkum nevhodný. Používá se v histologii a mikrobiologii , patologické anatomii . Nejběžnější chemické způsoby fixace; v mikrobiologii se často používá tepelná fixace.

Fixace vzorku předchází jeho barvení, s výjimkou vitálního barvení . V histologii je fixace krokem bezprostředně po získání vzorku.

Obecné požadavky na svorky

• Upevňovací prvky musí fungovat rychle.
• Neměly by způsobit deformaci tkání nebo je učinit křehkými.
• Musí převést buněčný obsah do stavu nerozpustného ve vodě a dalších kapalinách používaných při dalším zpracování léčiva.
• Nemělo by způsobit ztmavnutí drogy, ale naopak přispět k jejímu osvícení.
• V buňkách by neměly vytvářet fixační artefakty .
• Nemělo by narušovat barvení přípravku zvolenou metodou. To platí zejména při použití metod imunohistochemického barvení; např. při použití konvenčního formalínu často nelze detekovat antigenní struktury, v takových případech se doporučuje použít pufrovaný (neutrální) formalín.

Typy spojovacích prvků

Neexistují žádné univerzální fixátory, které by byly stejně vhodné pro všechny účely. Volba fixačního roztoku vychází z jeho výhod a nevýhod pro práci s konkrétním typem materiálu a vhodnosti pro konkrétní mikroskopickou vyšetřovací metodu.

Formalín

Nejběžnější typ fixačního roztoku . Jednoduché, levné, relativně málo rizikové pro pracovníka. Vodné roztoky formaldehydu se používají v čisté formě a jako součást směsí s jinými látkami, například s kyselinou octovou . Nevýhodou formalínových fixativ je nadměrné zhutnění tkáně [2] . Navíc při použití čistého formalínu je často možná bílá sraženina (krystaly kyseliny mravenčí ). Proto se častěji používá "pufrovaný" neutrální formalín.

Duchové

Čistý etylalkohol se používá jen zřídka, protože může mačkat materiál.

• Shafferova směs  - je tvořena 2 díly 80% etylalkoholu a 1 dílem formalínu. Doba fixace 1 - 2 dny.
• Carnoyova směs  - ze 6 dílů absolutního ethylalkoholu, 3 dílů chloroformu a 1 dílu kyseliny octové. Připraveno bezprostředně před použitím. Doba fixace 1/2 - 3 hodiny. Směs je vhodná pro fixaci předmětů s hustými schránkami (hmyz, škrkavky).
• Dietrichova kapalina je směs ethylalkoholu, formalínu, kyseliny octové a vody. Doba fixace 8 - 24 hodin. Vhodné pro členovce [3] .

Na bázi kyseliny pikrové

Předměty fixované směsmi na bázi kyseliny pikrové jsou ve vodě nestabilní, proto se předmět po fixaci přenese do 70% lihu. Po zafixování získá předmět žlutou barvu, která většinou neruší při práci.

• Směs kyseliny pikrové a octové. Nasycený roztok kyseliny pikrové v 10% kyselině octové. Vhodné pro malé a jemné předměty.
• Bouinová směs . 15 dílů nasyceného vodného roztoku kyseliny pikrové, 5 dílů formalínu, 1 díl kyseliny octové. Doba fixace je 2 hodiny. Poté lze předměty dlouhodobě skladovat, aniž by se zkazily přímo ve fixačním roztoku [3] .

Sublimovat

Fixativy na bázi sublimátu působí pomalu. používané v histologii. Dobré jaderné fixativy [4] .

Osmová kyselina

Fixativa na bázi kyseliny osminové jen málo mění strukturu tkání a buněk. Dobré jaderné fixátory. Barví tuky do tmavé barvy [5] . V elektronové mikroskopii se používá jako kontrastní činidlo. Extrémní toxicita a vysoká cena omezují použití osmiových fixativů.

Poznámky pod čarou

1. ↑ Roskin, 1946 , str. 81.
2. ↑ Roskin, 1946 , str. 88-89.
3. ↑ 1 2 Roskin, 1946 , str. 91.
4. ↑ Roskin, 1946 , str. 93.
5. ↑ Roskin, 1946 , str. 95.

Literatura

• Roskin G. I. Mikroskopická technika. - M. : Státní nakladatelství "Sovětská věda", 1946.