Chromatografie podle velikosti

Gelová filtrace nebo gelová vylučovací chromatografie (sítová, gelová permeační, gelová filtrační chromatografie) je typ chromatografie , při které dochází k separaci molekul látek podle velikosti díky jejich různé schopnosti pronikat do pórů stacionární fáze. V tomto případě kolonu jako první opouštějí největší molekuly (s vyšší molekulovou hmotností ), které jsou schopny proniknout do minimálního počtu pórů stacionární fáze. Jako poslední vycházejí látky s malou velikostí molekul, které volně pronikají do pórů. Na rozdíl od adsorpční chromatografie zůstává během gelové filtrace stacionární fáze chemicky inertní a neinteraguje s látkami, které mají být separovány.

Princip

Do kolony se zavede roztok vzorku , jehož objem je limitující pro kvalitu chromatografie. Pro analytické separace by neměl překročit 0,1 % CV (celkový objem kolony) a pro preparativní čištění by neměl překročit 8-10 % CV. Kolona je naplněna práškem, jehož částice nebo granule mají póry určitého průměru. Makromolekulární látky, které nejsou obsaženy v pórech, procházejí mezi granulemi, takže jejich retenční objem je roven objemu kolony mínus objem stacionární fáze (tzv. volný objem ). Eluují jako první. Molekuly střední velikosti zapadají do pórů sorbentu, ale ne úplně. Proto je jejich retenční objem mírně vyšší než objem volný. Uniknou jako druhé. Nejmenší molekuly volně vstupují do pórů spolu s molekulami rozpouštědla. Proto je jejich retenční objem v koloně mnohem vyšší než volný objem a blíží se celkovému objemu kolony (tj. 100 % CV). Uniknou jako poslední.

Sorbenty

Gel je heterogenní systém, ve kterém je mobilní fáze (obvykle voda) vždy uvnitř pórů stacionární nebo pevné fáze, nazývané gelová matrice.

Nízký tlak

Vysoký tlak