N-Ethylmaleimid

Aktuální verze stránky ještě nebyla zkontrolována zkušenými přispěvateli a může se výrazně lišit od verze recenzované 13. října 2019; ověření vyžaduje 1 úpravu .
N-Ethylmaleimid
Všeobecné
Systematický
název		 1-Ethylpyrrol-2,5-dion
Zkratky NEM
Tradiční jména Ethylmaleimid
Chem. vzorec C6H7NO2 _ _ _ _ _
Fyzikální vlastnosti
Molární hmotnost 125,12528 g/ mol
Tepelné vlastnosti
Teplota
 •  tání 43-46 °C
 •  varu 210 °C
Klasifikace
Reg. Číslo CAS 128-53-0
PubChem 4362
Reg. číslo EINECS 204-892-4
ÚSMĚVY   O=C1\C=C/C(=O)N1CC
InChI   1/C6H7NO2/cl-2-7-5(8)3-4-6(7)9/h3-4H,2H2,1H3HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N
CHEBI 44485
ChemSpider 4209
Údaje jsou založeny na standardních podmínkách (25 °C, 100 kPa), pokud není uvedeno jinak.
 Mediální soubory na Wikimedia Commons

N -Ethylmaleimid (NEM) je derivát kyseliny maleinové . Obsahuje imidovou funkční skupinu a je to aktivovaný alken , který reaguje s thioly a často se používá k modifikaci cysteinových zbytků v proteinech a peptidech [1] .

Chemické vlastnosti

N -Ethylmaleimid je Michaelův akceptor . To znamená, že může přidat nukleofily, jako jsou thioly. Thioether vzniklý v důsledku takové reakce má velmi silnou vazbu C–S a reakce je prakticky nevratná. Reakce probíhá při pH 6,5-7,5. N -ethylmaleimid může reagovat s aminy nebo podléhat hydrolýze při zásaditějším pH. N -ethylmaleimid byl široce používán k určení funkční role thiolových skupin v enzymologii . Je ireverzibilním inhibitorem všech cysteinových peptidáz, protože provádí alkylaci thiolových skupin v aktivním centru (viz diagram) [2] [3] .

Případové studie

NEM blokuje vezikulární transport . Lyzační pufry s 20-25 mM N -ethylmaleimidem se používají k inhibici desumoylace proteinu během Western blotu . NEM se také používá jako inhibitor deubikvitinylace .

Arthur Kornberg a kolegové použili N -ethylmaleimid k vypnutí DNA polymerázy III a porovnali její aktivitu s DNA polymerázou I. Kornberg získal Nobelovu cenu za objev DNA polymerázy I, která byla v té době považována za hlavní polymerázu bakteriální replikace . i když později jeho syn Thomas ukázal, že hlavní replikativní polymerázou v bakteriích je DNA polymeráza III, která v té době ještě nebyla objevena.

N -Ethylmaleimid aktivuje příjem draselných iontů v červených krvinkách ovcí a koz necitlivý na chloru [4] . O šestnáct let později tento objev přispěl k objevu kotransportérů K + /Cl - v lidských embryonálních buňkách, které zavedly izoformy cDNA KCC1 [ 5] . Od té doby je N -ethylmaleimid široce používán jako diagnostický nástroj pro stanovení přítomnosti K + /Cl - symportů v buňkách různých živočišných druhů [6] [7] [8] [9] .

Poznámky

  1. ↑ Thiolové reaktivní sondy Archivováno z originálu 28. ledna 2008. ve společnosti Invitrogen
  2. ↑ Nelson, D.L.; Cox, M. M. "Lehninger, Principy biochemie" 3. vyd. Worth Publishing: New York, 2000.
  3. ↑ Gregory, JD (1955) J. Am. Chem.
  4. ↑ Tok K+ závislý na chloridu indukovaný N-ethylmaleimidem v geneticky nízkých erytrocytech ovcí a koz s nízkým obsahem K+.
  5. ↑ Gillen CM, Brill S, Payne JA, Forbush B 3.: Molekulární klonování a funkční exprese kotransportéru K-Cl z králíka, potkana a člověka.
  6. ↑ Regulace kotransportu K-Cl: od funkce ke genům.
  7. ↑ K+ Cl Kotransport: Sulfhydryl, dvojmocné kationty a mechanismus aktivace objemu v červené krvince.
  8. ↑ . doi : 10.1016/j.cell.2009.05.031 .
  9. ↑ Jennings, ML & Al-Rohil, NSJ gen. fyziol. 95, 1021-1040, 1990

Externí odkazy