Hybridom je hybridní buněčná linie získaná fúzí dvou typů buněk: protilátku tvořících B-lymfocytů získaných ze sleziny imunizovaného zvířete (nejčastěji myši) a myelomových nádorových buněk . Buněčná fúze se provádí za použití činidla narušujícího membránu, jako je polyethylenglykol nebo virus Sendai . Vzhledem k tomu, že myelomové rakovinné buňky jsou „nesmrtelné“, to znamená, že jsou schopny se po fúzi a vhodné selekci mnohokrát dělit , hybridom, který produkuje monoklonální protilátkyantigen může být udržován po dlouhou dobu. V roce 1984 obdrželi Milstein , Köhler a Jerne Nobelovu cenu za fyziologii a medicínu za objev principu získávání monoklonálních protilátek .
Laboratorní zvířata ( savci , jako jsou myši) jsou imunizována, obvykle několika injekcemi antigenu po dobu 1–2 měsíců. Ze sleziny se pak získávají buňky, ze kterých se izolují lymfocyty. Jsou fúzovány s myelomovými buňkami, které jsou vybrány tak, aby samy o sobě neprodukovaly protilátky a neměly gen hypoxanthin-guanin fosforibosyltransferázy (HGPT), což je činí citlivými na selekční činidlo HAT (viz níže). Buněčná fúze se provádí pomocí činidla narušujícího membránu, jako je polyethylenglykol nebo Sendai virus .
Po fúzi se buňky udržují 10–14 dní v médiu obsahujícím HAT ( hypoxanthin , aminopterin a thymidin ). Aminopterin blokuje syntézu nukleotidů, takže buňky mateřského myelomu odumírají. Na rozdíl od myelomu hybridní buňky a B-lymfocyty s genem HHPT přežívají díky použití hypoxanthinu jako zdroje purinů , ale životnost běžných lymfocytů je omezená a po několika týdnech zůstávají v kultuře pouze hybridomové buňky. Protože ne všechny jsou tvořeny fúzí myelomu s lymfocyty, které produkují požadované protilátky, jsou buňky rozděleny do linií, které jsou udržovány v samostatných buňkách 96jamkových destiček. Dále jsou protilátky stanoveny v médiu nad buňkami a buněčné linie, které neprodukují protilátky nebo se dostatečně rychle nemnoží, jsou vyřazeny. Při dostatečně dobrém naředění buněčné suspenze se do jedné jamky nedostane více než jedna hybridní buňka, ale pro zajištění kvality a stability kultury lze vybrané buněčné linie znovu naklonovat tak, aby protilátky byly produkovány potomky jednoho hybridu buňky, to znamená, že jsou monoklonální [1] .
Klonovaná hybridomová kultura je poté subkultivována z jamky 96-jamkové destičky do větších nádob pro propagaci, skladování v kapalném dusíku a získání více protilátek pro další studie. Z kultivačního média lze získat od 1 do 60 ug/ml monoklonálních protilátek. Větší množství lze získat injekcí buněčné suspenze do břišní dutiny myší, kde hybridom proliferuje jako rakovinné buňky mateřského myelomu, secernuje protilátky do intrakavitární tekutiny s tvorbou ascitu (akumulace tekutiny v břišní dutině).