Izotachoforéza

Izotachoforéza (ITP) je metoda pro separaci různých typů iontů na základě jejich pohyblivosti v elektrickém poli . S ITF migrují všechny typy iontů stejným směrem a tvoří sadu zón, které jsou v rovnovážném stavu a pohybují se stejnou rychlostí.

Teoretické základy metody

Metoda ITF je založena na systému sestávajícím ze tří různých elektrolytů spojených společným protiiontem:

Pokud tímto systémem prochází elektrický proud , pak budou anionty uspořádány v sérii v souladu s jejich elektroforetickou pohyblivostí, vedoucí v oblasti anody , uzavření v oblasti katody , zbytek mezi nimi ve formě úzkých zón s jasnou koncentrací. hranice. Šířka jednotlivých zón na konci procesu odpovídá absolutnímu množství toho či onoho aniontu ve směsi .

Vzhledem k tomu, že jednotlivé zóny jsou uspořádány v sérii. jsou prakticky v kontaktu, proto se do testovaného vzorku zavede pufr obsahující anion se střední pohyblivostí , jehož zóna bude integrována do výsledné sekvence a posune zóny studovaných aniontů . Tyto pomocné zóny se nazývají spacery - separátory, jejichž funkce plní nosné amfolyty používané v metodě IEF . Charakteristickým rysem metody ITF je, že proces je doprovázen koncentrací zón, jejichž účinek vede k rozlišení srovnatelnému a dokonce lepšímu než separace metodou IEF . Výsledky separace směsí metodou ITF se zaznamenávají na záznamový pásek ve formě grafu měření tří parametrů:

Nástroje pro izotachoforézu

Analytická izotachoforéza se provádí v kapilárním zařízení pro izotachoforézu, v teflonové kapiláře o vnitřním průměru 0,5 mm.

Preparativní izotachoforéza se provádí v polyakrylamidové gelové koloně .

Aplikace izotachoforézy

  1. Analytická separace s vysokým rozlišením (μg) peptidů , proteinů , nukleotidů , organických kyselin , kovových iontů (částečně izotopů ).
  2. Preparativní separace proteinů (d).
  3. Akumulace ve formě úzké zóny stopových množství látek (µg) z velkých objemů vzorků vlivem koncentrace.
  4. Stanovení elektroforetické pohyblivosti.

Literatura

K. Geckeler, H. Eckstein. Analytické a preparativní laboratorní metody: Ref. red.: Perev. s ním. — M.: Chemie, 1994. — 416 s. nemocný.

Viz také