Isoelectric focusing ( IEF , anglicky IEF ), neboli elektrofocusing je technologie pro oddělování molekul (nejčastěji proteinů ) rozdílem jejich izoelektrických bodů . Jedná se o typ zónové elektroforézy , která se obvykle provádí v gelu. Protein, který je v zóně pH pod svým vlastním izoelektrickým bodem, bude kladně nabitý a bude se pohybovat směrem ke katodě . V důsledku pohybu se náboj molekuly sníží a pohyb se zpomalí. Výsledkem je, že proteiny vytvoří jasné pásy a každý protein se bude nacházet v gradientu pH podle svého izoelektrického bodu. Tato technologie umožňuje velmi jasně oddělit proteiny, které se liší izoelektrickým bodem.
Metoda se používá ke studiu proteinů, které se liší hodnotami izoelektrického bodu, tedy poměrem kyselých a bazických aminokyselinových zbytků . Proteiny jsou aplikovány na imobilizovaný pH gradient polyakrylamidového nebo agarózového gelu. Izoelektrická fokusace umožňuje oddělit proteiny, které se liší v izoelektrických bodech o méně než 0,01. [1] Izoelektrické zaostřování je prvním krokem při provádění dvourozměrné elektroforézy , při níž jsou proteiny nejprve odděleny izoelektrickými body a poté pomocí elektroforézy na polyakrylamidovém gelu podle molekulové hmotnosti .