Barrovo tělo

Barrovo tělo (X-sex chromatin) je neaktivní chromozom X  složený do husté ( heterochromatické ) struktury , pozorovaný v interfázových jádrech somatických buněk savců placentárních savců , včetně lidí. Dobře se barví základními barvivy [1] .

Kterýkoli ze dvou chromozomů X v genomu může být inaktivován na začátku embryonálního vývoje ; výběr se provádí náhodně. Výjimkou u myši jsou buňky zárodečných membrán , rovněž tvořené z tkáně embrya, ve kterých je inaktivován pouze otcovský X chromozom [2] .

U savčí samice, která je heterozygotní pro jakoukoli vlastnost určenou genem pro X-chromozom, tedy různé alely tohoto genu fungují v různých buňkách ( mozaika ). Klasickým viditelným příkladem takové mozaiky je zbarvení želvovinových koček  – v polovině buněk je aktivní chromozom X s „červeným“ a ve druhé polovině – s „černou“ alelou genu podílejícího se na tvorbě melanin . Želvovinové kočky jsou extrémně vzácné a mají dva X chromozomy ( aneuploidie ) [3] .

U lidí a zvířat s aneuploidií, která mají v genomu 3 nebo více X chromozomů (viz například Klinefelterův syndrom ), je počet Barrových tělísek v jádře somatické buňky o jeden menší než počet X chromozomů ( tj. vždy zůstává aktivní pouze 1 chromozom X, bez ohledu na to, kolik jich je).

Použití

Analýza pohlavního chromatinu se používá k:

1. Analýza podle buněk jedince jeho pohlaví, když není k dispozici pro výzkum (prenatální diagnostika pohlaví plodu, forenzní lékařské vyšetření atd.).
2. Identifikace pohlaví, pokud není jasná (např. při určování pravého nebo nepravého hermafroditismu).
3. Kontrola shody fenotypu s genotypem organismu (např. při vyšetřování žen na sportovních soutěžích).
4. Určení pohlaví plodu in utero, při podezření na onemocnění vázané na pohlaví (např. hemofilie, některé formy svalové dystrofie apod.), za účelem prevence porodu nevyléčitelně nemocného dítěte.
5. Používá se pro předběžnou diagnostiku odchylek v počtu nebo struktuře pohlavních chromozomů, když má subjekt porušení sexuálního vývoje.

Pokrok v získávání pohlavního chromatinu pro analýzu

1. Získání buněčného materiálu. Zdroje - různé tkáně, ale preferovány jsou ty, které není nutné kultivovat in vitro (in vitro).
2. Ke stanovení X-chromatinu u dospělého člověka se nejčastěji používají stěry z bukální sliznice , méně často z poševní sliznice a také z buněk vlasových folikulů. Perinatální diagnostika se provádí pomocí amniových buněk.
3. Pro stanovení počtu Y-chromatinu se používají výše uvedené tkáně, stejně jako spermie a také kultivované lymfocyty.
4. Obecně jsou jednovrstvé buněčné kultury, obvykle fibroblasty, ideální pro analýzu X-chromatinu a Y-chromatinu.
5. Fixace přípravků roztokem methanolu nebo směsí ethanolu a kyseliny octové (3:1) nebo samotným ethanolem.
6. Dehydratace přenosem (POUZE pro analýzu Barrových tělísek) drogy z jednoho roztoku do druhého s expozicí každému po dobu 5 minut: v alkoholu 70 °, v alkoholu 50 °, v destilované vodě I, v destilované vodě II.
7. Hydrolýza (POUZE pro analýzu Barrova těla) v HCl (volitelné).
8. Barvení pohlavním chromatinem. Metody barvení X- a Y-chromatinu jsou různé. První typ chromatinu se barví přípravky na bázi nefluorescenčních barviv: bazický fuchsin, thionin, acetoorcein, toluidinová modř aj. Druhý typ se barví fluorochromy - deriváty akridinové oranže: chinin, chinakrinní hořčice, chinakrinpropyl. Přípravky zrají v barvivu od 30 minut do 12 hodin.

Preparáty X-chromatinu se suší a zkoumají olejovou imerzí v procházejícím světle. Preparáty Y-chromatinu jsou uzavřeny ve speciálním pufrovacím roztoku a studovány v ultrafialovém světle pomocí luminiscenčního mikroskopu.

Analýza

Test se provádí na disjointovaných, rozprostřených buňkách. Tkáňové řezy pro stanovení pohlavního chromatinu se používají pouze tehdy, když není možné získat nátěry nebo preparáty-otisky řezu orgánu.

1. Mikroskopie.
2. Interpretace výsledků [4] .

Zdroje

1. ↑ Biologický encyklopedický slovník. M., "Sovětská encyklopedie", 1986.
2. ↑ M. Singer, P. Berg. Geny a genomy. M., "Mir", 1998. T. 2, S. 146.
3. ↑ Mozaika, kočky z želvoviny a geneticky nemožná koťata Archivováno 21. října 2009 na Wayback Machine .
4. ↑ Velká lékařská encyklopedie / Ed. A.N. Bakulev: ve 35 svazcích - M.: Medgiz, 1956. -1964. – 1151 s.