Výsev ( bakposev ) je jednou ze stacionárních metod kultivace mikroorganismů na živných půdách, která se používá pro kulturní diagnostiku v lékařské mikrobiologii i pro studium biochemických a biologických vlastností pro různé biotechnologické účely. V závislosti na obsahu studovaných bakterií ve vzorku se provádí očkování na hustá živná média (k získání izolovaných kolonií a stanovení čistoty kultury). Pokud je obsah mikroorganismů v testovaném materiálu nevýznamný, pak se inokulace provádí na kapalné obohacovací médium. Existují různé způsoby setí [1] .
Speciální metody se vyznačují přidáním konkrétní složky nebo změnou báze.
Volitelné metody se vyznačují získáním růstu pouze požadovaného mikroorganismu.
Umožňují identifikaci jednotlivých typů, druhů a skupin bakterií.
Pro plodiny [2] se používají mikrobiologické smyčky , méně často jehly a špachtle. Ke kultivaci se nejčastěji používá zkumavka a Petriho miska . Bakteriální smyčka je univerzální nástroj pro výsevové kultury . Kromě ní se k výsevu používá speciální bakteriální jehla s injekcí a k výsevu na Petriho misky se používají kovové nebo skleněné špachtle . Pro inokulaci tekutých materiálů se spolu se smyčkou používají odměrné a Pasteurovy pipety.
Při výsevu vezmou zkumavku do levé ruky a pravou ji, pevně sevřenou korek čtvrtým a pátým prstem, vyjmou. Držením smyčky ostatními prsty stejné ruky, nejprve ve vodorovné a poté ve svislé poloze, se přivede do otevřeného plamene a spálí se do červena . Inokulum se odebere chlazenou smyčkou, načež se zkumavka uzavře korkem, přičemž okraj zkumavky se předtím držel nad plamenem lihové lampy . Korek by se neměl pálit. Poté se do zkumavky se šikmým agarem zavede smyčka s inokulem, která se spustí ke kondenzátu ve spodní části média a materiál se rozloží klikatým pohybem po šikmém povrchu agaru. Po sejmutí smyčky spálíme okraj zkumavky a uzavřeme ji zátkou. Smyčka je flambována v plameni hořáku a umístěna do stativu rukojetí dolů. Kultivační zkumavky jsou předem podepsané s uvedením data inokulace, čísla studie a názvu kultury.
Plodiny „trávník“ produkované na hustém živném médiu v Petriho misce. Za tímto účelem se po mírném otevření víka levou rukou nanese inokulum smyčkou nebo pipetou na povrch živného agaru podle Drygalského metody. Po inkubaci výsevu se objeví rovnoměrný souvislý růst bakterií s jejich rozdělením do kolonií. Identifikace izolovaných bakteriálních kultur se provádí studiem morfologie bakterií, jejich kulturních, biochemických a dalších vlastností, které jsou každému druhu vlastní.
Kolonie je viditelná izolovaná akumulace zástupců jednoho druhu mikroorganismů, vzniklá rozmnožováním jedné kolonie tvořící jednotky ( CFU ) na pevném živném médiu (na povrchu nebo v jeho hloubce). Kolonie bakterií různých druhů se od sebe liší svou morfologií, barvou a dalšími kulturními charakteristikami.
Kolonie [3] se liší velikostí, tvarem, barvou, konzistencí, obrysem okraje, strukturou a charakterem povrchu:
V kapalném živném médiu poskytují některé bakteriální kultury difúzní zákal, zatímco jiné se vyznačují parietálním růstem blízko dna. Některé kultury tvoří filmy na povrchu média, jiné tvoří sraženinu na dně zkumavky.
Kultivace anaerobů se výrazně liší od kultivace aerobů : protože atmosféra obsahuje značné množství kyslíku , používají se k jeho odstranění z prostředí speciální osevní techniky, média a anaerostat [3] .