Hovězí sérový albumin

Bovinní sérový albumin (zkráceně BSA , eng.  Bovine Serum Albumin, BSA ) je hovězí plazmatický protein s molekulovou hmotností 69 000 Da , jednovláknový, sestávající z 607 aminokyselinových zbytků.

Struktura a vlastnosti

Bovinní sérový albumin (BSA) je nejrozšířenější a nejhojnější krevní protein (70 % celkového složení proteinů). Jeho plazmatická koncentrace je 35-55 mg/ml.

Hovězí sérový albumin je globule ve formě zploštělého rotačního elipsoidu s poloosami 17 x 42 angstromů, sestávající z 607 aminokyselinových zbytků, jejich seznam a počet jsou uvedeny v tabulce:

BSA má poměrně složitou prostorovou strukturu, která tvoří tři domény, z nichž každá je dále rozdělena na dvě subdomény (AB a C). Každá subdoména může být rozdělena do 3 helixů X, Y a Z. Sekundární struktura BSA se podle (1H NMR) dat skládá z 50-68 % alfa helixů, 16-18 % beta foldů. Terciární struktura je tvořena disulfidovými vazbami, kterých je v molekule BSA 17 kusů (podle počtu cysteinových aminokyselinových zbytků). Molekulová hmotnost BSA = -69 kDa.

Je to vhodný model pro studium vlastností globulárních proteinů.

Aplikace v laboratorní praxi

Vzhledem k dostupnosti výchozího materiálu, stabilním izolačním postupům a v důsledku toho relativně nízké ceně a známým vlastnostem je hovězí sérový albumin široce používán v laboratorní praxi.

BSA se používá jako standard v různých metodách pro kvantitativní stanovení proteinů, jako standard pro molekulovou hmotnost proteinů (marker) v gelové chromatografii a elektroforéze proteinů v denaturovaném stavu ( SDS-PAGE ) a také jako standardní antigen při určování změn imunitní odpovědi pod vlivem imunomodulátorů nebo jiných faktorů. Používá se také ke stabilizaci některých enzymů, zejména restrikčních endonukleáz. Zabraňuje ulpívání enzymů na stěnách cév.

Získání

Primitivní způsoby:

1. „Do krevního séra (krev bez fibrinu) se nalije voda v množství, které je dvacetkrát větší než objem séra, globulin se pak vysráží opatrným přidáním kyseliny octové. Poté, co se kapalina nechá usadit, filtruje se a neutralizuje sodou, odpaří se při 40 ° a většina solí se izoluje dialýzou.
2. „Pro technické účely se připravuje vykrvením přímo ze zvířete do mělkých zinkových kelímků o objemu několika litrů. Chladí ji, dokud se nestočí; je třeba dbát na to, aby se čerstvě odebraná krev neroztřepala, proto místo, kde se operace provádí, volte blízko zvířete. Když je krev úplně sražená, přemístí se do stejných misek s perforovaným dnem a krevní sraženina se nařeže na malé kousky, aby sérum mohlo vytéct. Sérum se shromažďuje a odpařuje při mírné teplotě, zbytek se nazývá albumin. Je třeba se vyvarovat jakéhokoli protřepávání, protože to poruší červené krvinky a zkazí barvu produktu. Pět býků vyprodukuje asi 20 litrů séra a asi 2 kg albuminu.“

Zdroje

• Prekurzor hovězího albuminu // UniProt Knoledge Base  (nedostupný odkaz)