Žlutý fluorescenční protein je genetická mutantní forma zeleného fluorescenčního proteinu ( GFP ) izolovaná z medúzy Aequorea victoria . Je charakterizována absorpčním maximem při 514 nm a maximem fluorescence při 527 nm. Je široce používán jako fluorescenční značka v buněčné a molekulární biologii ke studiu exprese buněčných proteinů. Kromě toho byla vyvinuta řada dalších mutantních forem GFP , jako je modrá, azurová atd. [1] .
Absorpční spektrum YFP se poměrně silně překrývá s fluorescenčním spektrem CFP ( angl. Cyan Fluorescent Protein ), proto se tyto dva fluorofory používají k vytvoření biosenzorů , které jsou založeny na Försterově jevu přenosu energie (FRET) . Takové senzory se používají k detekci určitých událostí vyskytujících se v živých buňkách. Tímto způsobem lze stanovit zejména aktivitu enzymu .
Molekula takového senzoru zpravidla obsahuje 4 domény [2] :
Když je takový senzor ozářen laserem s vlnovou délkou, která excituje pouze CFP (například 440 nm - téměř neexcituje YFP , ale silně excituje CFP ), lze pozorovat fluorescenci obou fluoroforů. Po příslušném dopadu na doménu 3 se změní struktura senzoru, v důsledku čehož se fluorofor YFP vzdaluje od CFP a účinnost Försterova přenosu klesá (v závislosti na tom, jak daleko byly fluorofory od sebe odděleny). V důsledku toho se intenzita fluorescence CFP zvyšuje, zatímco intenzita YFP klesá. Poměr fluorescence YFP k fluorescenci CFP lze tedy použít ke kvantifikaci změny konformace biosenzoru .