Test tvorby trombinu je nedílným indikátorem stavu systému srážení krve .
Trombin je hlavním enzymem systému srážení krve. Katalyzuje hlavní reakci tohoto systému, přeměnu fibrinogenu na fibrin . Kromě toho je to trombin, který provádí hlavní regulaci systému, aktivuje koagulační faktory V, VIII, VII, XI, XIII, protein C, krevní destičky , trombinem aktivovaný inhibitor fibrinolýzy. Konečně (což je důležité z praktického hlediska), během koagulace se tvoří více trombinu (10–100krát) než všechny ostatní koagulační serinové proteázy dohromady. Studium kinetiky trombinu může poskytnout mnoho dalších informací, které nejsou dostupné z prostého pozorování kinetiky srážení. Fibrinová sraženina je pouze konečným výsledkem procesu srážení; je důležité ho pozorovat, ale pro pochopení mechanismů procesu je nutné se podívat hlouběji.
Metody sledování koncentrace trombinu se objevily již poměrně dávno: již v 60. letech 20. století byly velmi aktivně prováděny studie kinetiky tvorby trombinu. Klasickou metodou stanovení koncentrace trombinu bylo srážení: vzorek s neznámou koncentrací trombinu byl smíchán s nerekalcifikovanou plazmou (jako u testu trombinového času) a koncentrace trombinu byla stanovena z doby srážení. Pro vynesení křivky koncentrace trombinu proti času byly vzorky odebírány v krátkých časových intervalech. Měření jedné křivky vyžadovalo koordinovanou práci dvou vysoce kvalifikovaných laborantů po dobu jedné hodiny a široké klinické uplatnění metody bylo nemyslitelné.
Nástup chromogenních a poté fluorogenních substrátů v 80. letech 20. století způsobil revoluci ve studiu krevní koagulace [1] , [2] . Takovým syntetickým substrátem je molekula, která je rozpoznána a štěpena serinovou proteinázou . Tento řez vede k odštěpení signální molekuly, značky, ze substrátu. Značka buď mění optickou hustotu roztoku (chromogenní, tj. barvící substrát), nebo je schopna při osvětlení fluoreskovat (fluorogenní substrát). Trombinové substráty by mohly být přidány přímo do plazmy a signál srážení mohl být zaznamenán. Rychlost nárůstu signálu je pak úměrná koncentraci trombinu, takže časovou závislost trombinu získáme z experimentální křivky jednoduchou diferenciací a normalizací na standardní křivku. Časně chromogenní substráty nebyly pro měření tvorby trombinu příliš vhodné, protože vyžadovaly defibrinaci plazmy; jinak vzhled sraženiny interferoval s pozorováním vzhledu barvící molekuly. Ale fluorogenní substráty, které po rozříznutí poskytly jasně svítivý štítek, umožnily měřit tvorbu trombinu přímo v běžné plazmě. Nárůst produktivity byl enormní: místo toho, aby dva lidé měřili stejnou křivku celou hodinu, mohl jeden člověk naložit na destičku vzorky, vložit je do destičkového fluorimetru a za hodinu získat data o několika desítkách vzorků.
Od 90. let 20. století je na klinice aktivně využívána nová metoda tvorby trombinu. Tento přístup, který vyvinul a vyvinul Konrad Hemker v Nizozemsku, je každým rokem stále více používán v Evropě a v posledních letech je dostupný také téměř po celém světě, včetně Ruska. Přehled této metody v ruštině od jejího tvůrce lze nalézt v [3] . Charakteristická křivka tvorby trombinu je uvedena v [1] .
Zpravidla se v něm rozlišují dva hlavní parametry: lag time (doba zpoždění koagulace) a endogenní trombinový potenciál (plocha pod křivkou tvorby trombinu). Četné experimenty a testy prokázaly, že tyto dva parametry jsou účinnými indikátory patologických procesů.
Stejně jako v tromboelastografii jsou výsledky testu tvorby trombinu výrazně závislé na experimentálních podmínkách: způsobu aktivace, koncentraci aktivátoru, použití plazmy chudé nebo bohaté na krevní destičky, přidání pomocných látek. Změnou těchto parametrů je možné odhalit různé poruchy koagulace. K detekci abnormalit v koagulaci plazmy se používá standardní aktivace malým množstvím tkáňového faktoru v chudé plazmě [4] . Je vhodný pro hromadnou analýzu vzorků, zejména při jejich přepravě nebo zmrazení. Generace trombinu v bohaté plazmě může navíc detekovat poruchy koagulace trombocytů, úspěšně detekovat sklon ke krvácení u Glanzmannovy trombastenie, Bernard-Soulierův syndrom, užívání antiagregačních léků [5] . Pokud je do plazmy přidán trombomodulin , pak tento test dokonce začne odhalovat některé hyperkoagulační poruchy: mutaci koagulačního faktoru V Leiden, důsledky užívání perorální antikoncepce a další [6] .