Adeno-asociovaný virus

adeno-asociovaný virus

Adeno-asociované viry
vědecká klasifikace
Skupina:Viry [1]Oblast:MonodnaviriaKrálovství:ShotokuviraeTyp:cossaviricotaTřída:QuintoviricetesObjednat:PiccoviralesRodina:ParvoviryPodrodina:ParvovirinaeRod:DependoparvovirusPohled:adeno-asociovaný virus
Mezinárodní vědecký název
Adeno-asociovaný dependoparvovirus A
Synonyma
  • Adeno-asociovaný virus 1 [2]
  • Adeno-asociovaný virus-1 [2] [3]
  • Adeno-asociovaný virus-2 [3]
  • Adeno-asociovaný virus-3 [3]
  • Adeno-asociovaný virus-4 [3]
Baltimorská skupina
II: viry ssDNA

Adeno-asociovaný virus ( angl.  Adeno-associated dependoparvovirus A , AAV) je malý virus , který infikuje buňky u lidí a některých dalších primátů . Zdá se, že adeno-asociovaný virus nezpůsobuje onemocnění u lidí, a proto vyvolává slabou imunitní odpověď.

Adeno-asociovaný virus může infikovat dělící se i nedělící se buňky a může integrovat svůj genom do genomu hostitele. Tyto vlastnosti činí z AAV zvláště atraktivního kandidáta pro návrh virových vektorů pro genovou terapii [4] .

Adeno-asociovaný virus patří do rodu Dependoparvovirus z rodiny parvovirů ( Parvoviridae ). Virus je malý (20 nm), nemá lipidový obal a nekóduje své vlastní replikační enzymy .

Historie

V roce 1965 publikoval Robert Atchison článek popisující nový virus nazvaný adeno-asociovaný virus [5] . Virové částice byly detekovány elektronovou mikroskopií v preparátech opičího adenoviru , které byly několikrát transplantovány na primární buněčné kultury ledvin opice rhesus . Atchisonova skupina separovala 24 nm částice nového viru od větších 80 nm adenovirových částic pomocí ultrafiltrace [6] .

Po izolaci se ukázalo, že částečně purifikované viriony adeno-asociovaného viru se nemohou samy replikovat , ale mohou se replikovat a šířit v kulturách infikovaných adenovirem . Adeno-asociovaný virus se tedy ukázal jako defektní doprovodný virus, který potřebuje pro plnou replikaci pomocný virus. Protože adeno-asociovaný virus nekóduje svou vlastní DNA polymerázu , potřebuje k replikaci pomocný virus, obvykle adenovirus [7] .

V červenci 2013 byly v důsledku revize čeledi sloučeny 4 blízce příbuzné druhy do jednoho, přičemž se název rodu změnil na Dependoparvovirus , a název druhu na Adeno-asociovaný dependoparvovirus A [3] .

Vektor pro genovou terapii

Výhody a nevýhody

Adeno-asociovaný virus divokého typu má některé výhody pro genovou terapii . Jednou z hlavních výhod je, že tento virus není patogenní . Adeno-asociovaný virus může infikovat nedělící se buňky a může se integrovat do hostitelského genomu na specifických místech (AAVS1) na devatenáctém chromozomu [8] .

Tato vlastnost činí adeno-asociovaný virus předvídatelnějším než retroviry . Retroviry jsou potenciálně nebezpečné jako mutageny , protože se náhodně vkládají do hostitelského genomu, což může vést ke vzniku rakovinných nádorů. Genom adeno-asociovaného viru se obvykle vkládá na specifické místo a náhodné inzerce se vyskytují se zanedbatelnou frekvencí. Při vytváření vektorů pro genovou terapii na bázi adeno-asociovaného viru jsou z virové DNA odstraněny geny rep a cap . Požadovaný gen je spolu s promotorem vložen mezi invertované terminální repetice ( inverted terminal repeats, ITR) , v důsledku čehož se v jádře po syntéze druhého řetězce DNA buněčnou DNA polymerázou vytvoří konkatamery .  Vektory pro genovou terapii založené na adeno-asociovaných virech tvoří epizomální konkatamery v jádře hostitelské buňky. V nedělících se buňkách zůstávají tyto konkatamery nedotčeny, v dělících se buňkách dochází ke ztrátě DNA adeno-asociovaného viru během buněčného dělení, protože epizomální DNA se během replikace DNA hostitelské buňky nereplikuje . Náhodné vložení DNA adeno-asociovaného viru do genomu hostitele je velmi vzácné. Adeno-asociovaný virus má také velmi nízkou imunogenicitu , zjevně omezenou nízkou účinností produkce neutralizačních protilátek , zatímco u posledně jmenovaných nebylo jasně prokázáno, že jsou cytotoxické [9] [10] [11] . Popsané vlastnosti, stejně jako schopnost infikovat nedělící se buňky, určují výhody adeno-asociovaného viru oproti adenovirům pro genovou terapii.

Použití adeno-asociovaného viru má také některé nevýhody. Kapacita virového genomu dostupná pro klonování terapeutických genů je pouze asi 4800 párů bází . Tento vektor tedy není vhodný pro klonování velkých genů. Invertované koncové repetice dvou genomů mohou hybridizovat a tvořit konkatamery hlava-ocas, čímž se kapacita vektoru téměř zdvojnásobí.

Infekce virem divokého typu často způsobuje aktivaci humorální imunity . Aktivita neutralizačních protilátek v některých případech snižuje použitelnost sérotypu AAV2 . AAV2 může také vstoupit do mozku a je vysoce neuronově specifický .

Klinické studie

V současné době procházejí první fází klinických studií léky (vektory) na bázi adeno-asociovaných virů pro léčbu cystické fibrózy a hemofilie . Slibné výsledky byly získány z první fáze klinických zkoušek léků proti Parkinsonově chorobě . Jiné klinické studie prokázaly bezpečnost adeno-asociovaných virových vektorů u Canavanovy choroby , svalové dystrofie a -Janskyho

Klinické studie vektorů založených na adeno-asociovaném virovém vektoru [12]
Choroba Gen Způsob podání Testovací fáze Počet testovaných osob Postavení
cystická fibróza CFTR Plíce, aerosol já 12 Dokončeno
CFTR Plíce, aerosol II 38 Dokončeno
CFTR Plíce, aerosol II 100 Dokončeno
Hemofilie B OPRAVIT Intramuskulární já 9 Dokončeno
OPRAVIT jaterní tepna já 6 Hotovo
Artritida TNFR:Fc intraartikulární já jeden Pokračovat
dědičný emfyzém AAT Intramuskulární já 12 Pokračovat
svalová dystrofie Sarkoglykan Intramuskulární já deset Pokračovat
Parkinsonova choroba GAD65, GAD67 uvnitř lebky já 12 Dokončeno [13]
Canavanská nemoc AAC uvnitř lebky já 21 Pokračovat
Battenova nemoc CLN2 uvnitř lebky já deset Pokračovat
Alzheimerova syndromu NGF uvnitř lebky já 6 Pokračovat
spinální svalová atrofie SMN1 intratekální I–III patnáct Několik zkoušek dokončeno, několik probíhajících ( Zolgensma )

Klinické studie pro léčbu rakoviny prostaty jsou od roku 2005 ve stadiu III [12] , nicméně tyto studie ex vivo nezahrnují přímé podávání ADV pacientům.

Patologie

Adeno-asociovaný virus se nepovažuje za způsobující onemocnění u lidí. Ukázalo se však, že tento virus je rizikovým faktorem mužské neplodnosti [14] . Genomová DNA adeno-asociovaných virů se nachází ve vzorcích spermatu s narušenou strukturou a funkcí spermií . Mezi touto infekcí a mužskou neplodností však nebyl nalezen žádný přímý vztah.

Role ve vývoji hepatocelulárního karcinomu

Nedávné studie pacientů se vzácnými formami hepatocelulárního karcinomu naznačují, že virus AAV2 může hrát roli ve spouštěcích faktorech této rakoviny. Vzhledem k tomu, že virus AAV2 se zaměřuje na geny, které hrají důležitou roli v reprodukci buněk, vědci se domnívají, že infekce vede k jejich nadměrné aktivaci, což má za následek růst nádoru. Tento objev zpochybňuje bezpečnost použití virů AAV2 pro genovou terapii [15] .

Struktura

Genom, transkriptom a proteom

Genom adeno-asociovaného viru obsahuje (+ nebo -) jednovláknovou DNA (ssDNA) o délce asi 4,7 tisíce nukleotidů. Na koncích molekuly genomové DNA jsou invertované terminální repetice ( ITR ) .  Genom obsahuje dva otevřené čtecí rámce ( ORF ) : rep a cap . První obsahuje čtyři překrývající se geny kódující proteiny Rep, které jsou nezbytné pro životní cyklus viru, druhý čtecí rámec obsahuje překrývající se nukleotidové sekvence kapsidových proteinů : VP1, VP2 a VP3, které tvoří ikosaedrickou hlavu kapsidy [16] .  

Invertovaný terminál se opakuje

Sekvence invertovaných terminálních repetic ( angl.  Inverted Terminal Repeat, ITR ) je 145 nukleotidů. ITR jsou umístěny symetricky v genomu adeno-asociovaných virů a jsou nezbytné pro replikaci genomové DNA [17] . Další z vlastností ITR je schopnost tvořit vlásenky, což umožňuje syntézu druhého vlákna DNA bez účasti primázy . Invertované koncové repetice jsou také nutné pro integraci virové DNA do specifické oblasti devatenáctého lidského chromozomu a pro uvolnění provirové DNA z chromozomu [18] [19] , stejně jako pro tvorbu komplexů adeno-asociovaných virová DNA s obalovými proteiny odolnými vůči deoxyribonukleáze [20] .

V případě genové terapie musí být ITR v cis pozici za terapeutickým genem. Tento vzor se používá k získání rekombinantních vektorů založených na adeno-asociovaném viru ( angl.  recombinant AAV, rAAV ) obsahujících reportérové ​​nebo terapeutické geny. Ukázalo se, že ITR nejsou vyžadovány v cis poloze pro replikaci a skládání kapsidy. V nukleotidové sekvenci genu rep byl nalezen cis -působící prvek závislý na Rep (CARE ) . V cis pozici CARE zlepšuje replikaci a sestavení virových částic [21] [22] [23] [24] .  

Geny a proteiny rep

„Levá strana genomu “ obsahuje dva promotory  , p5 a p19, ze kterých jsou transkribovány dvě překrývající se mRNA různých délek . Každý gen kódující odpovídající mRNA obsahuje intron , který může být vyříznut během procesu sestřihu . V důsledku toho mohou být syntetizovány čtyři různé mRNA a v souladu s tím čtyři různé proteiny Rep s překrývajícími se sekvencemi. Proteiny jsou pojmenovány podle jejich molekulových hmotností v kDa : Rep78, Rep68, Rep52 a Rep40 [25] . Rep78 a 68 specificky vážou jako primer vlásenku tvořenou převrácenými koncovými repeticemi a poté ji odříznou v místě terminálního rozlišení .  Ukázalo se, že Rep78 a 68 jsou nutné pro specifickou integraci DNA adeno-asociovaného viru do hostitelského genomu. Čtyři proteiny Rep vážou ATP a mají helikázovou aktivitu. Tyto proteiny zesilují transkripci z promotoru p40, ale zeslabují transkripci z promotorů p5 a p19 [19] [25] [26] [27] [28] [29] .

cap geny a VP proteiny

„Pravá strana“ (+) vlákna genomové DNA adeno-asociovaného viru obsahuje překrývající se sekvence kódující tři kapsidové  proteiny, VP1, VP2 a VP3. Transkripce těchto genů začíná z jediného promotoru , p40. Molekulová hmotnost odpovídajících proteinů je 87 , 72 a 62 kDa [30] . Všechny tři proteiny jsou translatovány ze stejné mRNA. Po transkripci lze pre-mRNA sestřihnout dvěma různými způsoby, přičemž se vyřízne delší nebo kratší intron a vytvoří se mRNA o 2300 nebo 2600 nukleotidech . Obvykle, zvláště v přítomnosti adenoviru , se vyřízne delší intron. V této formě je vyříznut první start kodon AUG , od kterého začíná syntéza proteinu VP1 a úroveň syntézy proteinu VP1 klesá. První kodon AUG, který zůstává v případě delšího transkriptu , je start kodon pro protein VP3. Nukleotidová sekvence předcházející tomuto kodonu ve stejném čtecím rámci však obsahuje sekvenci ACGkódující threonin , která je obklopena optimální Kozakovou sekvencí . To vede ke snížení syntézy proteinu VP2 (což je protein VP3 s dalšími aminokyselinovými zbytky na N-konci [31] [32] [33] [34] .

Vzhledem k tomu, že větší intron je přednostně vyříznut z pre-mRNA a protože kodon ACGje slabší start kodon, odpovídající proteiny jsou exprimovány in vivo v poměru přibližně 1:1:20 a proteiny jsou také zahrnuty ve virové částici. ve stejném poměru [35] . Jedinečný fragment na N-konci proteinu VP1 má aktivitu fosfolipázy A2 ( PLA2 ) ,  která je pravděpodobně nezbytná pro uvolňování virových částic z pozdních endozomů [36] . Muralidar et al prokázali, že proteiny VP2 a VP3 jsou nezbytné pro sestavení virové částice [33] . Warrington a kol. ukázali, že protein VP2 není nezbytně nutný pro sestavení virové částice, ani neovlivňuje patogenní vlastnosti viru. Fungování proteinu VP2 však není ovlivněno významnými inzercemi do N-terminální části, zatímco inzerce do VP1 snižují jeho fosfolipázovou aktivitu [37] .

Krystalovou strukturu proteinu VP3 určili v roce 2002 Xi a Bew et al [38] .

Sérotypy a receptory

Do roku 2006 bylo popsáno 11 sérotypů adeno-asociovaných virů [39] . Všechny známé sérotypy mohou infikovat buňky v mnoha typech tkání . Tkáňová specificita je určena sérotypem kapsidových proteinů , takže adeno-asociované virové vektory jsou navrženy tak, aby specifikovaly požadovaný sérotyp.

Sérotyp 2

Adeno-asociovaný virus sérotyp 2 byl nejrozsáhleji studován [40] [41] [42] [43] [44] [45] . Adeno-asociovaný virus sérotypu 2 má přirozenou afinitu ke kosternímu svalstvu [46] , neuronům [40] , hladkému svalstvu cév [47] a hepatocytům [48] .

Pro sérotyp 2 adeno-asociovaného viru byly popsány tři buněčné receptory: heparan sulfát proteoglykan (HSPG ) , integrin a  Vp5 a receptor 1 fibroblastového růstového faktoru ( FGFR- 1 ) . První z nich je primárním receptorem, poslední dva jsou koreceptory a umožňují adeno-asociovanému viru vstoupit do buňky receptorem zprostředkovanou endocytózou [49] [50] [51] [52] . HSPG je významně přítomen v extracelulární látce a působí jako primární receptor, přičemž čistí tělo od adeno-asociovaných virových částic a snižuje účinnost infekce [53] .  

Studie ukázaly, že adeno-asociovaný virus sérotypu 2 zabíjí rakovinné buňky, aniž by poškodil zdravé buňky. "Naše studie ukázaly, že adeno-asociovaný virus typu 2, který infikuje velkou populaci buněk, zabíjí mnoho typů rakovinných buněk, ale ne zdravé buňky," říká Craig Meyer , profesor imunologie a mikrobiologie na Penn State College of Medicine v USA. Pensylvánie [54] . Tyto studie mohou vést k vytvoření nových protirakovinných léků.

Jiné sérotypy

Ačkoli je adeno-asociovaný virus sérotyp 2 nejoblíbenějším sérotypem ve vědeckém výzkumu, ukázalo se, že jiné sérotypy jsou účinnějšími vektory pro přenos genů. Například adeno-asociovaný virus sérotypu 6 lépe infikuje epiteliální buňky dýchacího traktu, virus sérotypu 7 má velmi vysokou úroveň transdukce buněk kosterního svalstva myší, virus sérotypu 8 dobře transdukuje hepatocyty [55] [56] [57] , a viry sérotypu 1 a 5 jsou velmi účinné.dodávají geny do vaskulárních endoteliálních buněk [58] . Adeno-asociovaný virus sérotypu 6, který je hybridem sérotypu 1 a 2 [57] , má také nižší imunogenicitu než virus sérotypu 2 [56] .

Sérotypy se liší v receptorech, na které se vážou. Například transdukce viry sérotypů 4 a 5 může být inhibována roztokem kyseliny sialové [59] , zatímco virus sérotypu 5 vstupuje do buněk přes receptor pro růstový faktor destiček [60] .

Imunitní odpověď

Adeno-asociovaný virus je zvláště zajímavý pro genovou terapii kvůli jeho omezené schopnosti vyvolat imunitní odpověď u lidí. Tato vlastnost tohoto viru ho činí zvláště vhodným pro transdukci , protože snižuje riziko imunitních patologií.

Vrozená imunita

Zvířata vykazují vrozenou imunitní odpověď na adeno-asociovaný virus. Intravenózní podání viru myším způsobuje produkci zánětlivých cytokinů , infiltraci neutrofilů a dalších leukocytů do jater , což zřejmě významně snižuje počet injikovaných virových částic [61] .

Humorální imunita

Bylo prokázáno, že virus může způsobit humorální odpověď jak u zvířat, tak u lidí. Až 80 % lidské populace je séropozitivních sérotypu 2. Bylo prokázáno, že neutralizační protilátky mohou snížit transdukci adeno-asociovaných virových vektorů několika způsoby podání [62] .

Buněčná imunita

Buněčná imunitní odpověď na virus a vektory odvozené od viru nebyla dobře pochopena až do roku 2005 [62] . Klinické studie vektoru založeného na adeno-asociovaném viru sérotypu 2 pro léčbu hemofilie B ukázaly, že může dojít k destrukci transdukovaných buněk [63] . Studie ukázaly, že CD8+ T-lymfocyty dokážou rozpoznat prvky kapsidy adeno-asociovaného viru in vitro [64] , což ukazuje na potenciál pro cytotoxickou odpověď na vektory ve vztahu k T- lymfocytům . Tyto studie jsou však neúplné a možnost takové cytotoxické odpovědi nebyla plně prozkoumána.

Životní cyklus

V životním cyklu adeno-asociovaného viru, od stadia buněčné infekce po tvorbu nových virových částic, lze rozlišit několik fází:

  1. připojení k plazmatické membráně
  2. endocytóza
  3. pohyb uvnitř endozomu
  4. výstup z pozdního endozomu nebo lysozomu
  5. přesunout do buněčného jádra
  6. produkci replikativní virové dvouvláknové DNA
  7. expresi genu rep
  8. replikace genomové DNA
  9. exprese cap genů , syntéza dceřiné jednovláknové DNA
  10. sestava virionu
  11. uvolnění virových částic z infikované buňky

Některé z těchto kroků se mohou lišit v závislosti na typu buňky. Parametry replikace virové DNA se mohou také lišit mezi buňkami stejného typu v závislosti na fázi buněčného cyklu [65] .

Adeno-asociovaný virus není schopen replikovat se v buňkách, které nejsou infikovány adenoviry . Tento rys tvorby virových částic ukazuje, že adeno-asociovaný virus pochází z adenovirů. Ukázalo se, že replikace DNA adeno-asociovaného viru je usnadněna v přítomnosti určitých proteinů z adenovirů [66] [67] nebo jiných virů, jako je herpes simplex [68] nebo genotoxických látek, jako je ultrafialové záření nebo hydroxymočovina [69] [70 ] [71] .

Minimální soubor adenovirových genů potřebných pro propagaci adeno-asociovaných virů popsal Matsushita a Ellinger et al [66] . Tento objev umožnil vytvoření rekombinantních adeno-asociovaných virů, které nevyžadují koinfekci adenovirem. V nepřítomnosti pomocných virů nebo genotoxických faktorů může být DNA adeno-asociovaného viru vložena do hostitelského genomu v epizomální formě. V prvním případě je integrace do hostitelského genomu prováděna proteiny Rep78 a Rep68 a vyžaduje přítomnost invertovaných terminálních repetic ( ITR ) lemujících vloženou sekvenci .  U myší může genom adeno-asociovaného viru sídlit jako epizom (kruhová DNA, orientace hlava-ocas) v nedělících se tkáních – například v kosterním svalstvu [72] .

Viz také

Poznámky

  1. ↑ Taxonomie virů  na webu Mezinárodního výboru pro taxonomii virů (ICTV) .
  2. ↑ 1 2 ICTV Historie taxonomie: Adeno-associated dependoparvovirus A na webu ICTV  ( přístup  7. května 2017) .
  3. ↑ 1 2 3 4 5 Racionalizace a rozšíření taxonomie čeledi Parvoviridae  : [ eng. ] // ICTVonline. — Přidělený kód: 2013.001a-aaaV. - 2013. - 8. str.
  4. ↑ Grieger JC, Samulski RJ Adeno-asociovaný virus jako vektor genové terapie: vývoj vektorů, výroba a klinické aplikace  (anglicky)  // Pokroky v biochemickém inženýrství/biotechnologii. - Berlín , Německo , 2005. - Iss. 99 . - S. 119-145. — PMID 16568890 .
  5. ↑ Atchison RW, Castro BC, Hammon WM. Defektní virové částice spojené s adenovirem  (anglicky)  // Science. - 1965. - Sv. 149 . - str. 754-756 .
  6. ↑ Smith RH Adeno-asociovaná virová integrace: virus versus vektor // Gene Therapy. - 2008. - T. 15 , č. 11 . - S. 817-822 . - doi : 10.1038/gt.2008.55 .
  7. ↑ Ni TH, McDonald WF, Zolotukhin I, Melendy T, Waga S, Stillman B, Muzyczka N. Buněčné proteiny potřebné pro replikaci DNA adeno-asociovaného viru v nepřítomnosti koinfekce adenovirem // J Virol. - 1998. - T. 72 . - S. 2777-2787 .
  8. ↑ Surosky, RT; Urabe, M & Godwin, S. G. a kol. (1997), Adeno-associated virus Rep proteiny cílí sekvence DNA na jedinečný lokus v lidském genomu, Journal of virology v . 71 (10), PMID 9311886 
  9. ↑ Chirmule, N; Propert, K ​​​​& Magosin, S a kol. (1999), Immune responses to adenovirus and adeno-associated virus in people, Gene therapy (č. září): 1574-83, PMID 10490767 
  10. ↑ Hernandez, YJ; Wang, J & Kearns, W. G. a kol. (1999), latentní adeno-asociovaná virová infekce vyvolává humorální, ale ne buněčně zprostředkované imunitní reakce v modelu primátů jiného než lidského původu, Journal of virology (č. říjen): 8549-58, PMID 10482608 
  11. ↑ Ponnazhagan, S; Mukherjee, P & Yoder, MC a kol. (1997), přenos genu zprostředkovaný adeno-asociovaným virem 2 in vivo : orgánový tropismus a exprese transdukovaných sekvencí u myší, Gen (č. 29. dubna): 203-10, PMID 9185868 
  12. ↑ 1 2 Carter, BJ (2005), Adeno-Associated Virus Vectors in Clinical Trials, Human Gene Therapy vol. 16: 541-50, PMID 15916479 
  13. ↑ Kaplitt, M.G.; Feigin, A; Během, MJ & others (2007), Bezpečnost a snášenlivost genové terapie genem GAD pro Parkinsonovu nemoc neseným adeno-asociovaným virem (AAV): otevřená studie, fáze I, Lancet T. 369: 2097-2105, PMID 17586305 
  14. ↑ Erles K., Rohde V., Thaele M., Roth S., Edler L., Schlehofer JR DNA adeno-asociovaného viru (AAV) ve tkáni varlat a ve vzorcích abnormálního semene   // Hum . reprodukce. : deník. - 2001. - Listopad ( roč. 16 , č. 11 ). - str. 2333-2337 . — PMID 11679515 .
  15. ↑ Nault JC a kol. Rekurentní inzerční mutageneze související s AAV2 u lidských hepatocelulárních karcinomů // Přírodní genetika. — 2015.
  16. ↑ Carter, BJ (2000), Adeno-asociovaný virus a adeno-asociované virové vektory pro přenos genů, v DD Lassic & N Smyth Templeton, Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies , New York City : Marcel Dekker, Inc., str. 41-59, ISBN 0-585-39515-2 
  17. ↑ Bohenzky, R.A.; LeFebvre, RB & Berns, KI (1988), Požadavky na sekvenci a symetrii v rámci vnitřních palindromických sekvencí koncové repetice adeno-asociovaného viru, Virology ( San Diego : Academic Press). - T. 166 (2), PMID 2845646 
  18. ↑ Wang, XS; Ponnazhagan & Srivastava (1995), Záchranné a replikační signály genomu adeno-asociovaného viru 2, Journal of Molecular Biology sv. 250: 573-80, PMID 7623375 
  19. ↑ 1 2 Weitzman, MD; Kyostio, S.R.; Kotin, RM & Owens, RA (1994), Adeno-asociovaný virus (AAV) Rep proteiny zprostředkovávají tvorbu komplexu mezi AAV DNA a jejím integračním místem v lidské DNA, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 91 (13): 5808-12, PMID 8016070 
  20. ↑ Zhou, X & Muzyczka, N (1998), In vitro balení DNA adeno-asociovaného viru, Journal of virology vol . 72 (4): 3241-7, PMID 9525651 
  21. ↑ Nony, P; Tessier, J; Chadeuf, G & Ward, P a kol. (2001), Nový cis-působící replikační element v genomu adeno-asociovaného viru typu 2 se účastní amplifikace integrovaných rep-cap sekvencí, Journal of virology vol . 75 (20): 9991-4, PMID 11559833 
  22. ↑ Nony, P; Chadeuf, G; Tessier, J & Moullier, P a kol. (2003), Důkaz pro balení sekvencí rep-cap do kapsid adeno-asociovaného viru (AAV) typu 2 v nepřítomnosti invertovaných terminálních repetic: model pro generování rep-pozitivních AAV částic, Journal of virology v . 77, PMID 12477885 
  23. ↑ Philpott, NJ; Giraud-Wali, C; Dupuis, C & Gomos, J a kol. (2002), Efektivní integrace vektorů DNA rekombinantního adeno-asociovaného viru vyžaduje sekvenci p5-rep v cis, Journal of virology v . 76 (11), PMID 11991970 
  24. ↑ Tullis, GE & Shenk, T (2000), Efektivní replikace vektorů adeno-asociovaného viru typu 2: cis-působící prvek mimo koncové repetice a minimální velikost, Journal of virology T. 74 (24), PMID 11090148 
  25. ↑ 1 2 Kyostio, S.R.; Owens, R. A.; Weitzman, M. D. & Antoni, B. A. a kol. (1994), Analýza adeno-asociovaných virů (AAV) divokého typu a mutantních proteinů Rep pro jejich schopnosti negativně regulovat hladiny mRNA p5 a p19 AAV, Journal of virology vol . 68 (5): 2947-57, PMID 8151765 
  26. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1990), AAV origin binding protein Rep68 je ATP-dependentní místně specifická endonukleáza s DNA helikázovou aktivitou., Cell T. 61 (3): 447-57, PMID 2159383 
  27. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1992), Částečná purifikace adeno-asociovaného viru Rep78, Rep52 a Rep40 a jejich biochemická charakterizace, Journal of virology vol . 66 (2): 1119-28, PMID 1309894 
  28. ↑ Samulski, RJ (2003), AAV vektory, budoucí tahoun lidské genové terapie, workshop Ernst Schering Research Foundation (č. 43): 25-40, PMID 12894449 
  29. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988a), Regulace genové exprese adeno-asociovaného viru v buňkách 293: kontrola množství a translace mRNA, Journal of virology (č. 1): 68-74, PMID 2824856 
  30. ↑ Jay, FT; Laughlin, CA & Carter, BJ (1981), Eukaryotická translační kontrola: proteinová syntéza adeno-asociovaného viru je ovlivněna mutací v adenovirovém proteinu vázajícím DNA, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America T. 78 (5): 2927-31, PMID 6265925 
  31. ↑ Becerra, S. P.; Rose, JA; Hardy, M a další (1985), Přímé mapování adeno-asociovaných virových kapsidových proteinů B a C: možný ACG iniciační kodon, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, vol. 82 (23): 7919- 23, PMID 2999784 
  32. ↑ Cassinotti, P; Weitz, M & Tratschin, JD (1988), Organizace kapsidového genu adeno-asociovaného viru (AAV): mapování menší sestřižené mRNA kódující virový kapsidový protein 1, Virology T. 167 (1): 176-84 , PMID 2847413 
  33. ↑ 1 2 Muralidhar, S; Becerra, SP & Rose, JA (1994), Místně řízená mutageneze iniciačních kodonů strukturního proteinu adeno-asociovaného viru typu 2: účinky na regulaci syntézy a biologické aktivity, Journal of virology vol . 68 (1): 170-6, PMID 8254726 
  34. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988b), Alternativní sestřih mRNA je nutný pro syntézu kapsidového proteinu adeno-asociovaného viru VP1, Journal of virology v . 62 (9): 3356-63, PMID 2841488 
  35. ↑ Rabinowitz, JE & Samulski, RJ (2000), Budování lepšího vektoru: manipulace s viriony AAV, Virology T. 278 (2): 301-8, PMID 11118354 
  36. ↑ Girod, A; Wobus, CE; Zádori, Z a další (2002), Kapsidový protein VP1 adeno-asociovaného viru typu 2 nese doménu fosfolipázy A2 potřebnou pro infekčnost viru, The Journal of general virology T. 83 (5): 973-8, PMID 11961250 
  37. ↑ Warrington, KH,Jr; Gorbatyuk, OS; Harrison, JK a další (2004), kapsidový protein adeno-asociovaného viru typu 2 VP2 není nezbytný a může tolerovat velké peptidové inzerce na svém N konci, Journal of virology vol . 78 (12): 6595-609, PMID 15163751 
  38. ↑ Xie, Q; Bu, W; Bhatia, S a další (2002), Atomová struktura adeno-asociovaného viru (AAV-2), vektor pro lidskou genovou terapii, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 99(16): 10405-10, PMID 12136130 
  39. ↑ Mori, S; Wang, L; Takeuchi, T & Kanda, T (2004), Dva nové adeno-asociované viry z opice cynomolgus: pseudotypová charakterizace kapsidového proteinu, Virology T. 330 (2): 375-83, PMID 15567432 
  40. ↑ 12 Bartlett, J.S .; Samulski, RJ; McCown, TJ a další (1998), Selektivní a rychlé vychytávání adeno-asociovaného viru typu 2 v mozku, Human gene therapy vol. 9 (8): 1181-6, PMID 9625257 
  41. ↑ Fischer, AC; Beck, SE; Smith, CI a další (2003), Úspěšná exprese transgenu se sériovými dávkami aerosolizovaných vektorů rAAV2 u makaků rhesus, Molekulární terapie: časopis American Society of Gene Therapy sv. 8 (6): 918-26, PMID 14664794 
  42. ↑ Nicklin, SA; Buening, H; Dishart, KL a další (2001), Efektivní a selektivní přenos genu zprostředkovaný AAV2 zaměřený na lidské vaskulární endoteliální buňky, Molekulární terapie: časopis American Society of Gene Therapy sv. 4 (3): 174-81, PMID 11545607 
  43. ↑ Rabinowitz, JE; Xiao, W & Samulski, RJ (1999), Inzerční mutageneze kapsidy AAV2 a produkce rekombinantního viru, Virology T. 265 (2): 274-85, PMID 10600599 
  44. ↑ Shi, W & Bartlett, JS (2003), zahrnutí RGD do VP3 poskytuje vektory na bázi adeno-asociovaného viru typu 2 (AAV2) s mechanismem vstupu buněk nezávislým na heparansulfátu, Molecular therapy: časopis American Society of Gene Therapy T. 7 (4): 515-25, PMID 12727115 
  45. ↑ Wu, P; Xiao, W; Conlon, T a další (2000), Mutační analýza kapsidového genu adeno-asociovaného viru typu 2 (AAV2) a konstrukce vektorů AAV2 se změněným tropismem, Journal of virology vol . 74 (18): 8635-47, PMID 10954565 
  46. ↑ Manno, CS; Chew, AJ; Hutchison, S a další (2003), AAV-zprostředkovaný přenos genu faktoru IX do kosterního svalstva u pacientů s těžkou hemofilií B, Blood T. 101 (8): 2963-72, PMID 12515715 
  47. ↑ Richter, M; Iwata, A; Nyhuis, J a další (2000), Adeno-asociovaná virová vektorová transdukce buněk vaskulárního hladkého svalstva in vivo , Physiological genomics vol . 2 (3): 117-27, PMID 11015590 
  48. ↑ Koeberl, D.D.; Alexander, IE; Halbert, CL a další (1997), Trvalá exprese lidského srážecího faktoru IX z myších jater po intravenózní injekci adeno-asociovaných virových vektorů, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 94 (4): 1426 -31, PMID 9037069 
  49. ↑ Qing, K; Mah, C; Hansen, J a další (1999), Receptor lidského fibroblastového růstového faktoru 1 je koreceptor pro infekci adeno-asociovaným virem 2, Nature medicine T. 5 (1): 71-7, PMID 9883842 
  50. ↑ Summerford, C & Samulski, RJ (1998), Membrane-associated heparan sulfát proteoglykan je receptor pro viriony adeno-asociovaného viru typu 2, Journal of virology T. 72 (2): 1438-45, PMID 9445046 
  51. ↑ Summerford, C; Bartlett, JS & Samulski, RJ (1999), AlphaVbeta5 integrin: koreceptor pro infekci adeno-asociovaným virem typu 2, Nature medicine T. 5 (1): 78-82, PMID 9883843 
  52. ↑ Qiu, J; Handa, A; Kirby, M & Brown, KE (2000), Interakce heparinsulfátu a adeno-asociovaného viru 2, Virology T. 269 (1): 137-47, PMID 10725206 
  53. ↑ Pajusola, K; Gruchala, M; Joch, H a další (2002), Charakteristiky specifické pro buněčný typ modulují účinnost transdukce adeno-asociovaného viru typu 2 a brání infekci endoteliálních buněk, Journal of virology T. 76 (22): 11530-40, PMID 12388714 
  54. ↑ CNN.com (2005), Common virus „zabíjí rakovinu“ , < http://www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html > 
  55. ↑ Gao, G.P.; Alvira, M. R.; Wang, L & other (2002), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol. 99 (18): 11854-9, PMID 12192090 
  56. ↑ 12 Halbert , C.L.; Allen, JM & Miller, AD (2001), vektory adeno-asociovaného viru typu 6 (AAV6) zprostředkovávají účinnou transdukci epiteliálních buněk dýchacích cest v myších plicích ve srovnání s vektory AAV2, Journal of virology. (J Virol) Jul; (): T. 75 (14): 6615-24, PMID 11413329 
  57. ↑ 1 2 Rabinowitz, JE; Bowles, D. E.; Faust, SM a další (2004), Cross-dressing the virion: transkapsidace sérotypů adeno-asociovaných virů funkčně definuje podskupiny, Journal of virology vol . 78 (9): 4421-32, PMID 15078923 
  58. ↑ Chen, S; Kapturczak, M; Loiler, SA a další (2005), Efektivní transdukce vaskulárních endoteliálních buněk pomocí vektorů rekombinantního adeno-asociovaného viru sérotypu 1 a 5, Human gene therapy vol. 16 (2): 235-47, PMID 15761263 
  59. ↑ Kaludov, N; Brown, K.E.; Walters, RW a další (2001), Adeno-asociovaný virus sérotyp 4 (AAV4) a AAV5 vyžadují vazbu kyseliny sialové pro hemaglutinaci a účinnou transdukci, ale liší se specifitou vazby kyseliny sialové, Journal of virology T. 75 (15): 6884- 93, PMID 11435568 
  60. ↑ Di Pasquale, G; Davidson, B.L.; Stein, CS a další, Identifikace PDGFR jako receptoru pro transdukci AAV-5, Nature medicine T. 9 (10): 1306-12, PMID 14502277 
  61. ↑ Zaiss, A.K.; Liu, Q; Bowen, GP a další (2002), Differential Activation of Innate Immune Responses by Adenovirus and Adeno-Associated Virus Vectors, Journal of Virology vol . 76(9): 4580-90, PMID 11932423 
  62. ↑ 1 2 Zaiss, AK & Muruve, DA (2005), Immune responses to adeno-associated virus vectors, Current Gene Therapy vol. 5 (3): 323-31, PMID 15975009 
  63. ↑ Vysoká, K.A.; Mannos, CS; Pierce, GF a další (2006), Úspěšná transdukce jater u hemofilie pomocí AAV-Factor IX a omezení vyvolaná imunitní odpovědí hostitele, Nature Medicine sv. 12 (3): 342-47, PMID 16474400 
  64. ↑ Vysoká, K.A.; Sabatino, D.E.; Mingozzi, F & další (2005), Identifikace myších AAV kapsidově specifických CD8+ T buněčných epitopů, Molekulární terapie T. 12 (6): 1023-33, PMID 16263332 
  65. ↑ Rohr, U.P.; Kronenwett, R; Grimm, D a další (2002), Primární lidské buňky se liší ve své citlivosti na přenos genu zprostředkovaného rAAV-2 a trvání exprese reportérového genu, Journal of virological methods vol. 105 (2): 265-75, PMID 12270659 
  66. ↑ 1 2 Matsushita, T; Elliger, S; Elliger, C a další (1998), Adeno-asociované virové vektory mohou být účinně produkovány bez pomocného viru, Gene therapy vol. 5 (7): 938-45, PMID 9813665 
  67. ↑ Myers, M. W.; Laughlin, CA; Jay, FT a další (1980), Pomocná funkce adenoviru pro růst adeno-asociovaného viru: účinek teplotně citlivých mutací v oblasti raného genu adenoviru 2, Journal of virology vol . 35 (1): 65-75, PMID 6251278 
  68. ↑ Handa, H & Carter, BJ (1979), Adeno-asociované virové DNA replikační komplexy v buňkách infikovaných virem herpes simplex nebo adenovirem, The Journal of biologické chemie T. 254 (14): 6603-10, PMID 221504 
  69. ↑ Yalkinoglu, A.O.; Heilbronn, R; Bürkle, A a další (1988), DNA amplifikace adeno-asociovaného viru jako odpověď na buněčný genotoxický stres, Cancer research vol . 48 (11): 3123-9, PMID 2835153 
  70. ↑ Yakobson, B; Koch, T & Winocour, E (1987), Replikace adeno-asociovaného viru v synchronizovaných buňkách bez přidání pomocného viru, Journal of virology T. 61 (4): 972-81, PMID 3029431 
  71. ↑ Yakobson, B; Hrynko, T. A.; Peak, MJ & Winocour, E (1989), Replikace adeno-asociovaného viru v buňkách ozářených UV světlem při 254 nm, Journal of virology vol . 63 (3): 1023-30, PMID 2536816 
  72. ↑ Duan, D; Sharma, P; Yang, J a další (1998), Kruhové meziprodukty rekombinantního adeno-asociovaného viru mají definované strukturální charakteristiky odpovědné za dlouhodobou epizomální perzistenci ve svalové tkáni, Journal of virology vol . 72 (11): 8568-77, PMID 9765395 


Literatura

  • Shakhbazov A.V., Severin I.N., Goncharova N.V., Grinev V.V., Kosmacheva S.M., Potapnev M.P. Virové vektory pro stabilní transdukci lidských mezenchymálních kmenových buněk: systémy založené na adeno-asociovaných virech a lentivirech // Buněčné technologie v biologii a medicíně. - 2008. - T. 4 . - S. 216-218 .