Reverzní transkripční PCR

V molekulární biologii je reverzní transkripční polymerázová řetězová reakce běžně označována jako RT - PCR .  RT-PCR je metoda pro amplifikaci specifického fragmentu ribonukleové kyseliny ( RNA ). [jeden] 

Jednořetězcová molekula RNA je přeměněna v reakci reverzní transkripce (RT, angl.  RT, reverse transcription ) na komplementární DNA ( cDNA ) a poté je již jednořetězcová molekula DNA amplifikována pomocí tradiční PCR . RT-PCR by se neměla zaměňovat s PCR v reálném čase ( Q - PCR ), která se také někdy nesprávně zkracuje jako RT-PCR .  [2]

Popis metody

Reverzní transkriptáza se používá k přeměně sekvence RNA na komplementární DNA :

• 1. Reakce prvního řetězce: Komplementární DNA ( cDNA ) je tvořena na mRNA templátu z dNTP enzymem reverzní transkriptázou. Reakční složky se smíchají s DNA primerem a pufrem pro reverzní transkriptázu po dobu jedné hodiny při 37 °C.
• 2. Reakce druhého řetězce: Po dokončení reverzní transkripce a vytvoření cDNA na templátu mRNA se provádějí další cykly podle standardní metody PCR .

Po 30 cyklech amplifikace se vytvoří miliony kopií požadované sekvence. [2]

Aplikace

RT-PCR se používá k detekci molekul RNA ve vzorku se známou oblastí sekvence komplementární k primeru. Exponenciální amplifikace pomocí RT-PCR je citlivá technika, která dokáže detekovat malý počet molekul RNA.

Příkladem jsou RNA viry, jako je virus lidské imunodeficience (HIV), což je retrovirus , a proto používá enzym HIV - reverzní transkriptázu k syntéze virové DNA, která je pak integrována do hostitelského genomu . 

RT-PCR je také široce používána pro diagnostiku genetických onemocnění a semikvantitativní stanovení specifických molekul RNA v buňce nebo tkáni jako indikátor exprese odpovídajících genů [3] .

Viz také

• Polymerázová řetězová reakce (PCR)
• PCR v reálném čase

Poznámky

1. ↑ Hunt M. (2006) Real time PCR tutorial - Copyright 2006, Správní rada University of South Carolina . Získáno 20. října 2009. Archivováno z originálu 4. října 2009. (neurčitý)
2. ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Molekulární biotechnologie. Principy a aplikace. - Moskva: Mir, 2002. - 589 s. — ISBN 5030033289 .
3. ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Absolutní kvantifikace mRNA pomocí reverzních transkripčních polymerázových řetězových reakcí v reálném čase  . - 2000. - S. 169-193.

Literatura

• Glick B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Principy a aplikace. - Moskva: Mir, 2002. - 589 s. — ISBN 5030033289 .

Slovníky a encyklopedie	velká čínština Britannica (online)