Micelární elektrokinetická chromatografie (MEKC)

Micelární elektrokinetická chromatografie (MEKH)  je druh kapilární elektroforézy , která umožňuje oddělit nenabité (neutrální) a nabité složky vzorku. Používá se v analytické chemii a je hybridem mezi kapilární elektroforézou a kapalinovou chromatografií .

Jak to funguje

Princip činnosti MEKC je založen na distribuci složek vzorku mezi dvě mobilní fáze: hydrofilní a hydrofobní. Hydrofilní fáze je vodný pufr a hydrofobní fáze jsou micely. Micely se tvoří spontánně v roztoku, když je dosaženo kritické koncentrace micel (CMC) povrchově aktivní látky . Molekuly surfaktantu jsou amfifilní: skládají se z nabité hydrofilní hlavy a hydrofobního ocasu, takže ve vodném roztoku mají tendenci tvořit kulovitou strukturu s hydrofilními hlavami na povrchu a hydrofobními ocasy uvnitř. Takto získané micely jsou dynamické struktury, které jsou neustále rozebírány a znovu sestavovány, takže mohou interagovat s neutrálními hydrofobními složkami vzorku a zadržovat je v kapiláře. Jako povrchově aktivní látka se nejčastěji používají látky s negativně nabitou hlavou: dodecylsulfát sodný (DSDS, anglicky SDS), tetradecylsulfát sodný (anglicky STS) a další. V MEKC se někdy používají také pozitivně nabité povrchově aktivní látky: cetyltrimethylamonium bromid (angl. CTAB).

Teoretické aspekty

Tlumivý roztok a micely se pohybují uvnitř kapiláry působením elektrického pole. Stejně jako u kapilární elektroforézy je pohyb pufru a složek vzorku řízen dvěma jevy: elektroforetickou pohyblivostí (pouze pro nabité molekuly) a elektroosmotickým tokem (pro všechny molekuly). Záporně nabité SDS micely se působením elektrického pole pohybují směrem k anodě, ale výraznější elektroosmotický tok je táhne směrem ke katodě. Jak roztok pufru, tak micely se tedy pohybují směrem ke katodě, i když se micely pohybují mnohem pomaleji než roztok. Čím více času stráví složka vzorku v interakci s micelami, tím později kapiláru opustí. Separace složek vzorku závisí na tom, kolik času každá složka stráví v roztoku pufru a jak dlouho interaguje s micelami. Tento mechanismus je podobný rozdělovací chromatografii, kde se místo stacionární fáze používá pseudostacionární fáze, micely.

Separace složek vzorku

Micely, které mají na svém povrchu náboj, mohou přitahovat opačně nabité složky vzorku a zadržovat je v kapiláře. Takže micely z SDS, které mají na povrchu záporný náboj, si zachovají kationty . To je důvod, proč kationty opustí kapiláru později než všechny ostatní složky vzorku. Separace kationtů také závisí na jejich poměru náboj/hmotnost. To znamená, že kationty s větší hmotností opustí kapiláru později než kationty s menší hmotností.

Záporně nabité složky vzorku budou naopak odpuzovány od záporně nabitých micel a od záporně nabité stěny kapiláry, což znamená, že kapiláru opustí jako první. Separace aniontů také probíhá s přihlédnutím k jejich molekulové hmotnosti . Čím menší je hmotnost aniontu, tím rychleji opustí kapiláru.

Neutrální složky vzorku interagují s hydrofobními jádry micel a tato interakce bude přímo úměrná stupni hydrofobnosti složky vzorku. Čím hydrofobnější je neutrální molekula, tím více bude setrvávat v kapiláře a tím později ji opustí. Hmotnost neutrálních hydrofobních složek nehraje při separaci MEKC roli.

Pořadí složek vzorku na grafu tedy bude následující: 1) anionty s nízkou molekulovou hmotností 2) anionty s vysokou molekulovou hmotností 3) vysoce hydrofobní neutrální molekuly 4) méně hydrofobní neutrální molekuly 5) kationty s nižší hmotností 5) kationty s a větší hmotnost [1] .

Aplikace

MEKC se používá v analytické chemii k separaci neutrálních složek vzorku při analýze směsí neutrálních a nabitých molekul. Široce se používá k detekci léčiv v biologických tekutinách (krev, plazma). Používá se ve farmaceutickém průmyslu.

Poznámky

  1. Gabriel Hancu, Brigitta Simon, Aura Rusu, Eleonora Mircia, Árpád Gyéresi. Principy micelární elektrokinetické kapilární chromatografie aplikované ve farmaceutické analýze  // Advanced Pharmaceutical Bulletin. - 2013. - Svazek 3 , č. 1 . — S. 1–8 . — ISSN 2228-5881 . - doi : 10.5681/apb.2013.001 . Archivováno z originálu 23. února 2022.