Barveno hematoxylinem a eosinem

Barvení hematoxylinem a eosinem (barvení hematoxylin-eosinem) je jednou z nejběžnějších metod barvení v histologii . Je široce používán v lékařské diagnostice , zejména v onkologii pro barvení odebrané nebo bioptické tkáně.

Barvení zahrnuje použití základního barviva hematoxylin , které barví bazofilní buněčné struktury jasně modře, a alkoholového kyselého barviva eosin Y , které barví struktury eozinofilních buněk červeno-růžově. Bazofilní struktury jsou obecně ty, které obsahují nukleové kyseliny ( DNA a RNA ): buněčné jádro , ribozomy a oblasti cytoplazmy bohaté na RNA . Eosinofilní struktury obsahují intra- a extracelulární proteiny , jako jsou Lewyho tělíska . Cytoplazma je eozinofilní prostředí. Erytrocyty se vždy barví jasně červeně.

Technika barvení hematoxylinem-eosinem

  1. Parafin se z řezů odstraní v orthoxylenu nebo toluenu , provede se alkoholy sestupnou koncentrací a přivede se do vody (dvě dávky xylenu nebo toluenu - 3-5 minut, 96 ° ethanol - 3 minuty, 80 ° ethanol - 3 minuty, 70 ° ethanol – 3 minuty, destilovaná voda – 5 minut).
  2. Barveno hematoxylinem po dobu 7-10 minut (v závislosti na zralosti barviva).
  3. Opláchněte v destilované vodě po dobu 5 minut.
  4. Diferencujte v 1% kyselině chlorovodíkové v 70° ethanolu, dokud řezy nezhnědnou.
  5. Opláchněte destilovanou vodou a poté slabým (0,5%) roztokem amoniaku , dokud řezy nezmodrají.
  6. Barveno vodným roztokem eosinu po dobu 0,5-1 minuty (v závislosti na požadované barvě).
  7. Promyté ve třech dávkách destilované vody k odstranění přebytečného eosinu.
  8. Odstraňte vodu z řezů jednou dávkou 70° ethanolu, dvěma dávkami 96° ethanolu. Expozice v každé porci alkoholu - 2 minuty.
  9. Řezy se čiří ve dvou dávkách karbol-xylenu (směs roztaveného fenolu a xylenu nebo toluenu v poměru 1:4 nebo 1:5) - 1 minuta.
  10. Řezy se dehydratují ve dvou dávkách xylenu nebo toluenu. Zůstaňte plátky 2 minuty.
  11. Uzavřete řezy do kanadského balzámu nebo syntetického média pro uzavření histologických řezů.

Některé struktury se nebarví dobře hematoxylinem a eosinem (obvykle hydrofobním ) a vyžadují jiné metody barvení. Například oblasti buněk bohaté na lipidy a myelin zůstávají nezbarvené: adipocyty , myelinová pochva axonů neuronů , membrána Golgiho aparátu atd.

Viz také

Odkazy