LB medium ( ang. Lysogeny broth ) je bohaté médium pro růst bakteriálních kultur. Zkratka LB je často mylně interpretována jako vývar Luria , vývar Lennox nebo středa Luria-Bertani . Podle autora středečního receptu Giuseppe Bertaniho zkratka LB znamená angličtinu. lyzogenní bujón – lyzogenní médium. [1] Složení LB média bylo poprvé publikováno v roce 1951 v Bertaniho práci o lysogenii. Tento článek popisuje izolaci fágů Enterobacteriaceae P1, P2 a P3 v jeho vlastním médiu pro optimální růst Shigella a tvorbu fágových plaků. [1] [2]
LB médium se stalo standardem pro pěstování kultur Escherichia coli od 50. let 20. století. [3] [4] [5] [6] [7] LB médium je široce používáno v molekulární mikrobiologii pro izolaci plazmidové DNA a rekombinantních proteinů. Médium zůstává nejběžněji používané pro pěstování rekombinantních kmenů Escherichia coli . [8] Využití prostředí LB pro výzkum v oblasti fyziologie je omezené. [9]
Bylo popsáno několik formulací média LB. Mají podobné složení a obsahují:
Zdrojem peptidů a peptonů je trypton . V kvasnicovém extraktu jsou obsaženy vitamíny a stopové prvky . Ionty sodíku, nezbytné pro transport a osmotickou rovnováhu, se do média přidávají ve formě chloridu sodného . Trypton je také zdrojem esenciálních aminokyselin .
V původním článku z roku 1951 Bertani použil 10 gramů NaCl a 1 gram glukózy na 1 litr média; Luria v prostředí "L vývaru" z roku 1957 zcela kopírovala Bertaniho prostředí. [6] Následující recepty neobsahují glukózu.
Receptury média LB se liší množstvím přidaného chloridu sodného, což umožňuje vytvořit podmínky pro pěstování různých kmenů bakterií. Média s nízkým obsahem soli, Lennox LB a Luria LB se používají k pěstování kultur s antibiotiky citlivými na sůl. [deset]
Obecná metoda přípravy 1 litru média:
Před autoklávováním někteří výzkumníci upravují pH média na 7,5 nebo 8 roztokem hydroxidu sodného . Hydroxid sodný však nemá žádné pufrovací vlastnosti, takže při množení bakterií se pH média dramaticky mění. Pro udržení určité hodnoty pH někteří výzkumníci upravují pH na požadovaných 5-10 mM Tris roztoku při daném pH (ačkoli použití pufru v této koncentraci nemůže zajistit udržení daného pH během růstu bakterií). Ve většině případů není vyžadováno přesné pH média.