Allofykocyanin (z řečtiny : ἄλλος (allos) – „jiný“, φύκος (fycos) – „řasa“ a κυανός (kyanos) – „modrý“) je světlosběrný protein z rodiny fykobiliproteinů , který také zahrnuje fykocyanin , fykocyanrin . a fykoerythrocyanin a je pomocným pigmentem pro chlorofyl . Všechny fykobiliproteiny jsou rozpustné ve vodě, a proto nemohou být membránově ukotveny jako karotenoidy , ale místo toho tvoří shluky ukotvené v membráně zvané fykobilisomy .. Allofykocyanin absorbuje a vyzařuje červené světlo (650 a 660 nm) a je snadno detekovatelný u sinic a červených řas . Schopnost fykobilinů emitovat světlo se používá v soupravách pro imunotesty. Allofykocyanin se často používá v průtokové cytometrii , počítání a třídění buněk a mikroskopii . K tomu se do něj zavádí chemické zesítění.
Allofykocyanin lze izolovat z různých typů červených nebo modrozelených řas, z nichž každá syntetizuje svou vlastní, mírně odlišnou formu této molekuly. Protein se skládá ze dvou typů podjednotek (α a β), z nichž každá nese jednu chromoforovou skupinu fykokyanobilinu . Obecný vzorec proteinu lze popsat jako (αβ) 3 . Molekulová hmotnost alofykokyaninu je 105 kDa.
| Absorpční maximum | 652 nm |
| Dodatečné absorpční maximum | 625 nm |
| Radiační maximum | 657,5 nm |
| Stokesův posun | 5,5 nm |
| extinkční koeficient | 2,4 x 105 M −1 cm −1 |
| kvantový výstup | 0,68 |
| Jas | 1,6 x 10 5 M −1 cm −1 |
Zesítěný alofykokyanin
Jak bylo uvedeno výše, aby bylo možné použít alofykokyanin v imunotestu, musí být chemicky zesíťován, aby se zabránilo disociaci jeho podjednotek, ke které dochází poměrně často ve standardních fyziologických pufrech. [1] Tradiční metodou je smíchání s 1-ethyl-3,3-dimethylaminopropylem, silným síťovacím činidlem. Poté se zpracuje osmimolárním roztokem močoviny a poté se nechá renaturovat, ale již ve fyziologickém pufru. Tento postup vám umožní zbavit se nezesítěných podjednotek. [2] Existují alternativní metody, jejichž použití umožňuje uložit nativní strukturu trimeru a získat lesklejší konečný produkt [3] .