Průtoková cytometrie (průtoková cytometrie) je metoda pro studium disperzních médií v režimu po částech analýzy prvků disperzní fáze pomocí rozptylu světla a fluorescenčních signálů . Název metody je spojen s hlavní aplikací, konkrétně se studiem jednotlivých biologických buněk v proudu.
Základem metody je 1) použití hydrofokusačního systému, který zajišťuje průchod buněk v proudu po jedné; 2) ozařování buněk laserovým zářením; 3) registrace signálů rozptylu světla a fluorescence z každé buňky.
Kromě toho analýza bere v úvahu úroveň fluorescence chemických sloučenin, které tvoří buňku (autofluorescence) nebo zavedené do vzorku před průtokovou cytometrií.
Buněčná suspenze, předem značená fluorescenčními monoklonálními protilátkami nebo fluorescenčními barvivy, vstupuje do proudu kapaliny procházející průtokovou kyvetou. Podmínky jsou voleny tak, aby se buňky seřadily jedna za druhou kvůli tzv. hydrodynamické zaměření proudnice v proudnici. Hydrodynamická fokusace je zajištěna velkým specifickým průtokem ve vnějším paprsku (tryskovém plášti) ve srovnání se specifickým průtokem vzorku. Schematicky je princip fungování znázorněn na videu. Jak se specifický průtok ve vnějším proudu zvyšuje, buňky se řadí jedna za druhou. V okamžiku, kdy buňka překročí laserový paprsek, detektory zaznamenají:
Intenzita rozptylu závisí na morfologii buňky (velikost, tvar, vnitřní struktura), na orientaci buňky v toku vzhledem ke směru dopadajícího záření a na stavu polarizace dopadajícího záření.
Intenzitu fluorescence tvoří dva příspěvky: specifická fluorescence a autofluorescence. Specifická fluorescence je spojena s emisí molekul fluorochromu, které jsou specificky spojeny s určitými buněčnými složkami (receptory, intracelulární proteiny, DNA atd.). Autofluorescence je spojena s emisí vlastních molekul buňky (proteinů, nukleových kyselin atd.). Intenzita specifické fluorescence závisí na počtu molekul fluorochromu v buňce, na vlnové délce excitačního záření, na absorpčním (extinkčním) průřezu fluorochromu při této vlnové délce, na kvantovém výtěžku fluorochromu, na numerické apertuře optického záření. fluorescenční sběrný systém a spektrální rozsah optického filtračního a detekčního systému. Intenzita autofluorescence podobně závisí na optických vlastnostech vlastních molekul buňky. V praxi se příprava buněk před měřením provádí tak, že příspěvek specifické fluorescence převyšuje příspěvek autofluorescence o několik řádů.
Zařízení pro analýzu buněk průtokovou cytometrií se nazývají průtokové cytometry nebo průtokové cytometry . Nejpopulárnější průtokové cytometry v Rusku a SNS jsou Beckman Coulter Life Sciences [1] a Becton Dickinson Biosciences .
Tandemová barviva:
"Kvantové tečky" QD560, QD590 atd.
| Patologie v medicíně | |
|---|---|
| patohistologie | Poškození buněk apoptóza Nekrobióza karyopyknóza karyorexií karyolýza Nekróza koagulační nekróza kolikvační nekróza gangréna sekvestrace infarkt Buněčná adaptace Atrofie Hypertrofie Hyperplazie Dysplazie Metaplazie skvamózní glandulární Dystrofie Protein mastný uhlohydrát Minerální |
| Typické patologické procesy |
|
| Laboratorní diagnostika a pitva |
|