N-konec

Aktuální verze stránky ještě nebyla zkontrolována zkušenými přispěvateli a může se výrazně lišit od verze recenzované 28. srpna 2017; kontroly vyžadují 2 úpravy .

N - konec ( anglicky  N-terminus ), také amino-konec  , je aminoskupina první aminokyseliny, kterou začíná molekula proteinu nebo peptid [1] .

Každá aminokyselina má aminoskupinu a karboxylovou skupinu . Aminokyseliny se na sebe vážou dehydratační reakcí přidáním karboxylové skupiny jedné aminokyseliny k aminoskupině druhé. Polypeptidové řetězce tedy končí volnou karboxylovou skupinou - C-koncem a začínají aminoskupinou - N-koncem [1] .

Metody pro stanovení N-koncové aminokyseliny

Pro stanovení povahy N-terminální aminokyseliny byla navržena řada metod, zejména Sangerova metoda (F. Sanger), založená na arylační reakci polypeptidu 2,4-dinitrofluorbenzenu (DNFB), která vede k tvorbě žlutě zbarveného 2,4-dinitrofenylového derivátu N-terminální aminokyseliny. Na roztok polypeptidu se působí DNFB, který interaguje s volnou NH2 skupinou N-terminální aminokyseliny peptidu.

Po kyselé hydrolýze reakčního produktu, dinitrofenylpeptidu, se na činidlo váže pouze jedna N-terminální aminokyselina ve formě 2,4-dinitrofenylaminokyseliny (stabilní při hydrolýze). Na rozdíl od jiných volných aminokyselin vzniklých během hydrolýzy polypeptidu je žlutý. Identifikuje se chromatografií.

Pro stanovení N-terminální aminokyseliny je mnohem více využívána fenylthiohydantoinová Edmanova metoda pro její vysokou citlivost a možnost vícenásobného použití ve stejném vzorku. Fenylizothiokyanát reaguje s volnou a-NH2 skupinou N-terminální aminokyseliny polypeptidu za vzniku fenylthiokarbamoylpeptidu.

Poznámky

  1. 1 2 Nelson, Cox, 2011 , str. 128.

Literatura