Terapeutická angiogeneze

Terapeutická angiogeneze (také nazývaná biologický shunting ) je taktika stimulace tvorby nových krevních cév pro léčbu nebo prevenci patologických stavů charakterizovaných snížením této funkce [1] .

Rozsah

Potřeba terapeutické angiogeneze se soustřeďuje do oblasti distálních forem chronické ischemie dolních končetin (CLLI), ischemické choroby srdeční , infarktu myokardu , u kterých jsou chirurgické metody léčby buď nemožné nebo dostatečně účinné, spojené s vysokou frekvencí kontraindikací a komplikací [2] [3] .

Historie terapeutické angiogeneze

Koncept terapeutické angiogeneze se začal rozvíjet po práci J. Folkmana , který vypracoval teorii o vývoji a udržování dostatečného krevního zásobení pomocí angiogenních růstových faktorů v nádorových tkáních.
Po identifikaci růstových faktorů krevních cév začali vědci testovat hypotézy o stimulaci angiogeneze při léčbě ischemických stavů. Poprvé v klinické praxi byla terapeutická angiogeneze použita J. Isnerem. V roce 1994 byl 71letému pacientovi ve vážném stavu s kritickou ischemií dolních končetin (CLLI), IV . 5] .
Dalším klinickým výzkumníkem byl I. Baumgartner, který provedl řadu studií u pacientů s CLLI, popsal a klasifikoval možné nežádoucí účinky [6] .

Mechanismus terapeutické angiogeneze

Obvykle existují dva procesy, které jsou základem terapeutické angiogeneze: angiogeneze a vaskulogeneze [7] .
Vaskulogeneze je proces in situ tvorby krevních cév z endoteliálních progenitorových buněk (EPC), které migrují a fúzují s jinými endoteliálními progenitorovými buňkami do kapilár a diferencují se na endoteliální buňky za vzniku nových cév. Tato forma je nejčastější v embryonálním období [8] .
Angiogeneze zahrnuje prodlužování již vytvořených cév a je procesem pučení nových kapilár, včetně aktivace endoteliálních buněk, degradace extracelulární matrix, proliferace a migrace endoteliocytů a tvorby primárních vysoce permeabilních cévních struktur. Následně dochází ke stabilizaci a „dorůstání“ primárních vaskulárních struktur díky náboru buněk jiného typu: pericytů a buněk hladkého svalstva, což vede k organizaci komplexní trojrozměrné vaskulární sítě [8] .
Hlavním stimulačním faktorem angiogeneze za fyziologických a patologických podmínek je nedostatek kyslíku. Hypoxie stimuluje tvorbu většiny angiogenních faktorů a především hlavního regulátoru angiogeneze v embryonálním i postnatálním období vývoje organismu – vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF) a jeho receptorů (VEGF-R). Bylo identifikováno více než 20 faktorů, které stimulují nebo inhibují proces angiogeneze (tabulka 1). Některé faktory v závislosti na dávce mohou být jak induktory angiogeneze, tak inhibitory [9] [10] . V současné době termín „terapeutická angiogeneze“ zahrnuje oba výše popsané procesy pro růst nových krevních cév [11] [12] [13] .

Tabulka 1  - "Induktory a inhibitory angiogeneze"

Klinické metody terapeutické angiogeneze

Pro proces terapeutické angiogeneze se používají různé terapeutické přístupy:

• zavedení rekombinantních proteinů - induktorů angiogeneze (růstové faktory);
• použití buněčné terapie;
• zavedení genových konstruktů kódujících faktory.

Zavedení rekombinantních proteinů - induktorů angiogeneze

Vědci, kteří podrobně znají fyziologické účinky vaskulárního endoteliálního růstového faktoru a mají pozitivní zkušenosti s používáním proteinových faktorů stimulujících hematopoézu, syntetizovali proteinové molekuly vaskulárního endoteliálního růstového faktoru a základního fibroblastového růstového faktoru (bFGF).
První nekontrolované klinické studie u pacientů s onemocněním koronárních tepen a pacientů s kritickou ischemií dolních končetin (CLLI) s použitím rekombinantních proteinů ukázaly povzbudivé předběžné výsledky, pokud jde o účinnost. Údaje z dvojitě zaslepených, placebem kontrolovaných studií však byly méně optimistické. Dvě velké studie, které testovaly intrakoronární podávání rekombinantních růstových faktorů (VEGF ve studii VIVA u 178 pacientů s ICHS, kteří nebyli optimálními kandidáty pro chirurgickou nebo endovaskulární revaskularizaci; FGF-2 ve studii FIRST u 337 podobných pacientů), nedokázaly najít rozdíly mezi výsledky ve skupinách s placebem.
Ve studii TRAFFIC (FGF-2 byl podáván dvakrát do stehenní tepny u pacientů s CLLI), ve které došlo k výraznějšímu prodloužení doby bezbolestné chůze u těch, kteří dostávali FGF-2 v prvních 3 měsících. vyrovnal po 6 měsících. zvýšením doby chůze bez bolesti ve skupině s placebem. Výsledky této studie však vyvolaly určitý optimismus ohledně možnosti použití rekombinantního FGF-2 v CLLI.
Je možné, že neúspěch kontrolovaných studií terapeutické angiogeneze s použitím rekombinantních růstových faktorů byl způsoben nesprávně zvoleným způsobem zavedení faktoru. Rekombinantní proteiny mají krátký poločas v krevním řečišti, navíc bylo prokázáno, že při intravaskulární cestě podání je velmi malá část proteinu zadržena v myokardu (0,1 % pro intravenózní podání a 5 % pro intrakoronární podání ). Pro efektivní využití rekombinantních růstových faktorů je nutné je zavádět lokálně do myokardu nebo kosterního svalstva ve formě komplexů s matrix proteiny, které zajišťují dlouhodobé lokální uvolňování faktoru [14] .

Využití buněčné terapie

Tvorba nových cév je v současnosti považována za dva vzájemně související procesy – angiogenezi a vaskulogenezi. Vaskulogeneze zahrnuje účast endoteliálních progenitorových buněk kostní dřeně (EPC), které se přesouvají do místa tvorby nových cév, kde se diferencují na endoteliální buňky již na svém místě. Nejprobádanější metodou buněčné terapie ischemických chorob končetin je stimulace uvolňování buněk EPCs do krevního řečiště, jejich izolace z krevního řečiště a zavedení do ischemické oblasti. Na základě analýzy preklinických a řady klinických studií lze dojít k závěru, že zavedení prekurzorů endoteliocytů nebo stimulace uvolňování prekurzorů endoteliálních buněk urychluje tvorbu kolaterálních cév a zároveň minimalizuje oblast ischemického poškození. Proces však vyžaduje speciálně vybavenou laboratoř a počet získaných buněk se obvykle liší.
Mechanismus angiogenního působení kmenových buněk (SC) odvozených z dospělého organismu zahrnuje pravděpodobně parakrinní účinky spojené se sekreční aktivitou buněk a jejich diferenciací na specifické vaskulární buňky, stejně jako fúzi s tkáňovými buňkami. Specifická váha každého z těchto mechanismů nebyla plně stanovena a experimentální data jsou spíše rozporuplná. Do značné míry je však stimulace neovaskularizace se zavedením SC způsobena jejich sekreční aktivitou. To potvrzuje i skutečnost, že nárůst počtu cév v myokardu experimentálních zvířat byl pozorován zavedením téměř všech typů buněk používaných pro buněčnou terapii: krvetvorných a mezenchymálních buněk kostní dřeně, EC prekurzorů (cirkulujících a kostní dřeně), buňky získané z pupečníkové krve a dokonce kosterní myoblasty [14] [15] .

Zavedení genových konstruktů kódujících růstové faktory

Alternativou k rekombinantní proteinové terapii může být genová terapie . Převládají dva typy vektorových systémů, které se používají k dodání terapeutického genu do ischemické oblasti: plazmidy a rekombinantní adenoviry [16] .
Na rozdíl od rekombinantních proteinů působí genetické konstrukty v cílové tkáni jeden až několik týdnů a poskytují méně náhlé a delší zvýšení obsahu angiogenního faktoru, což zabraňuje častým a opakovaným injekcím, což zase zabraňuje senzibilizaci těla [14]. . V preklinických studiích na zvířatech prokázalo použití DNA plazmidů genovou expresi trvající od několika dnů do několika měsíců s poměrně nízkou pravděpodobností dalšího přenosu. Tato doba je považována za relativně krátkou ve srovnání s virovými vektory, což je bezpečnostní faktor pro přípravu na bázi plazmidového vektoru. Plazmidy jsou ničeny extracelulárně i intracelulárně nukleázami , což zajišťuje lokalizaci a časové omezení procesu. Během velkého počtu studií genové terapie pro stimulaci angiogeneze byly k dosažení maximální bezpečnosti a účinnosti použity především lokální injekce [17] .
Použití adenovirových vektorů se vyznačuje vysokou účinností přenosu genového materiálu. Je však třeba vzít v úvahu, že v lidském těle jsou často přítomny adenovirové protilátky, které snižují účinnost přenosu na úroveň 5 % - úroveň srovnatelnou s charakteristikou nevirového přenosu genu. Virový genový přenos také vyžaduje speciální opatření biologické bezpečnosti, která nejsou nezbytná pro nevirové vektory pro přenos genů. Otázky bezpečnosti se také odrážejí ve zvýšeném výskytu nežádoucích účinků v klinických studiích s adenovirovými vektory: přechodná horečka, zvýšený C-reaktivní protein, zvýšené jaterní enzymy a titry adenovirových protilátek [18] .

K realizaci informace obsažené v plazmidu nebo rekombinantním viru dochází jako výsledek syntézy proteinů. Syntéza probíhá tradičním způsobem ( přepis , překlad ). Tvorba angiogenního růstového faktoru způsobuje řadu fyziologických změn vedoucích k růstu nové cévy. Na procesu angiogeneze se podílí velké množství angiogenních faktorů, ale nejaktivnějším proangiogenním cytokinem je vaskulární endoteliální růstový faktor (VEGF), který je také nejvíce studován jak v preklinických, tak v klinických studiích.

Proces růstu cév s jeho účastí lze popsat v následující sekvenci [11] :

1. Vazba VEGF na receptory na povrchu endoteliálních buněk ve stávajících cévách.
2. Aktivace endoteliocytů v důsledku změn v konfiguraci VEGF receptorů.
3. Uvolňování proteolytických enzymů aktivovanými endoteliálními buňkami, které rozpouštějí bazální membránu obklopující mateřské cévy.
4. Rozpouštění matricové látky matricovými metaloproteázami.
5. Proliferace a migrace endotelových buněk přes bazální membránu do ischemické zóny pomocí adhezivních molekul na buněčném povrchu.
6. Vazba endoteliocytů na sebe a tvorba tubulárních struktur.
7. Tvorba cévních smyček.
8. Diferenciace cévních kliček na arteriální a venózní cévy.
9. Zrání nových krevních cév připojením dalších parietálních buněk (hladký sval, pericyty) a stabilizace vaskulární architektury.
10. Začátek průtoku krve ve zralé stabilní cévě.

Angiogenní modifikace materiálů (vitalizace)

Absence cévního řečiště v umístěných implantátech, stejně jako jeho nedostatečně rychlý vývoj a integrace s cévní sítí recipientní oblasti, je jedním z nejdůležitějších problémů spojených s „selháním“ implantátu „fungovat“. Řešení problému vaskularizace umělých implantátů se vyvíjí dvěma způsoby: 1 - vytvoření podmínek pro aktivní vaskularizaci po implantaci pomocí různých bioinženýrských struktur (s využitím růstových faktorů, kmenových buněk); 2 - vytvoření cévní sítě před implantací do těla in vitro [19] .

K angiogenní modifikaci ( vitalizaci ) syntetických vláknitých materiálů se používají přípravky pro genovou terapii na bázi plazmidů kódujících vaskulární endoteliální růstové faktory [7] . Takto modifikované genově aktivované materiály se používají k vytvoření vaskularizovaných matric bioinženýrských orgánů a tkání [7] [20] .

Genové přípravky pro terapeutickou angiogenezi

Při požadavku na publikace v databázi týkající se terapeutické angiogeneze a růstových faktorů byly získány následující statistiky:

V klinické studii dominují konstrukty genové terapie nesoucí gen VEGF. Tabulka č. 2 odráží hlavní studie provedené a probíhající s těmito prototypy léčiv.

Tabulka 2. Klinické studie konstruktů genové terapie s genem VEGF

Zkratky: IHD — ischemická choroba srdeční; HINK - chronická ischemie dolních končetin; KINK - kritická ischemie dolních končetin

První a jediný lék pro genovou terapii pro terapeutickou angiogenezi byl zaregistrován v Rusku v roce 2011 (datum Republiky Uzbekistán −28.09.2011). Lék je plasmidová superspirálová deoxyribonukleová kyselina pCMV-VEGF165 kódující lidský vaskulární endoteliální růstový faktor. Indikace pro použití léku: v komplexní terapii revaskularizace při ischemii dolních končetin aterosklerotického původu (IIa-III stupeň podle A.V. Pokrovského-Fonteina).
Droga vstoupila na trh pod obchodním názvem „ Neovasculgen “. Podává se lokálně, intramuskulárně, co nejblíže ischemické oblasti a stimuluje rozvoj kolaterálního oběhu. [2, 38, 39]
Podle výsledků klinických studií ruského léku lze zaznamenat následující klinické rysy terapeutické angiogeneze:

1. Použití léku v komplexní konzervativní léčbě vede ke stabilnímu klinickému zlepšení (udržení účinku po dobu 3 měsíců, 6 měsíců, 1 rok, 2 roky), které se projevuje zvýšením vzdálenosti chůze bez bolesti, zvýšením kotník-pažní index a transkutánní kyslíkové napětí [17] .
2. Ukazatel „počet velkých amputací, úmrtí“ u pacientů s ischemií stadia III podle klasifikace A. V. Pokrovského-Fonteina je 6 % [2].
3. Výrazný klinický efekt u různého stupně závažnosti ischemie dolních končetin podle klasifikace A. V. Pokrovského-Fonteina (IIa, IIb, III) [38].

Tabulka 3. Výsledky použití léku na bázi nukleové kyseliny (Neovasculgen) kódující VEGF v komplexní konzervativní terapii [17] .

* statisticky významné rozdíly ve srovnání s výchozí hodnotou (p≤0,05, neparametrický Wilcoxonův test).
Při hodnocení dynamiky ukazatelů s přihlédnutím k počátečnímu stupni ischemie bylo zjištěno, že pro všechny skupiny pacientů (IIA, IIB, III. stadium ischemie) je charakteristická přetrvávající pozitivní dynamika. Vzdálenost bezbolestné chůze se tak ve větší míře prodloužila u středně těžké a těžké ischemie, o čemž svědčí nárůst o 90 dní. o 160 % a 173 % s IIB a III čl. ischemie, resp. Zdá se velmi významné, že ABI u nejzávažnější skupiny pacientů vzrostlo o více než 0,1 z úrovně 0,33±0,08 na 0,46±0,07 po 90 dnech. a až 0,48±0,1 za rok. Stejný trend byl pozorován z hlediska TcPO2 – u těžších pacientů byla zaznamenána výraznější odpověď na terapii (nárůst o 35,2 % po 90 dnech a o 32,5 % po roce).

Tabulka 4. Výsledky použití léku na bázi nukleové kyseliny (Neovasculgen) kódující VEGF v komplexní konzervativní terapii [21] .

* statisticky významné rozdíly od výchozí hodnoty
' statisticky významné rozdíly mezi 90 dny. a 1 rok (p≤0,05, neparametrický Wilcoxonův test).

Poznámky

1. ↑ Hockel M., Schlenger K., Doctrow S. a kol. Terapeutická angiogeneze. Arch Surg. 1993; 128:423-9.
2. ↑ Schwalb P. G., Gavrilenko A. V. , Kalinin R. E. et al. Účinnost a bezpečnost Neovasculgenu v komplexní terapii pacientů s chronickou ischemií dolních končetin (fáze IIb-III klinických studií) . Buněčná transplantologie a tkáňové inženýrství . 2011; 3:76-83.
3. ↑ Mzhavanadze N.D., Bozo I.Ya., Kalinin R.E., Deev R.V. Realita a vyhlídky pro použití genové terapie v kardiovaskulární chirurgii Buněčná transplantologie a tkáňové inženýrství . 2012; 2:51-5.
4. ↑ Isner J., Walsh K., Symes J. et al. Arteriální genová terapie pro terapeutickou angiogenezi u pacientů s onemocněním periferních tepen. oběh. 1995; 91:2687-92.
5. ↑ Isner J., Pieczek A., Schainfeld R., Blair R. et al. Klinický důkaz angiogeneze po arteriálním genovém transferu phVEGF165 u pacienta s ischemickou končetinou. Lancet 1996 10. srpna;348(9024):370-4.
6. ↑ Baumgartner I., Rauh G., Pieczek A. et al. Edém dolních končetin spojený s přenosem genů holé DNA kódující vaskulární endoteliální růstový faktor. Ann Intern Med. 2000; 132(11):880-4.
7. ↑ 1 2 3 Klabukov I.D., Balyasin M.V., Lundup A.V., Krasheninnikov M.E., Titov A.S., Mudryak D.L., Shepelev A.D., Tenchurin T.Kh., Chvalun S.N., Dyuzheva T.G. Angiogenní vitalizace biokompatibilní a biodegradabilní matrice (experimentální studie in vivo)  // Patologická fyziologie a experimentální terapie. - 2018. - T. 62 , č. 2 . - S. 53-60 . — ISSN 0031-2991 . Archivováno z originálu 26. června 2018. (Ruština)
8. ↑ 1 2 Madeddu P. Terapeutická angiogeneze a vaskulogeneze pro regeneraci tkání. experimentální fyziologie. 2004; 90:315-26.
9. ↑ Mäkinen K. Angiogenesis — nový cíl v terapii okluzivních onemocnění periferních tepen. Acta Chir Belg. 2003; 103:470-4.
10. ↑ Malecki M., Kolsut P., Proczka R. Angiogenní a antiangiogenní genová terapie. Genová terapie. 2005; 12:159-69.
11. ↑ 1 2 Li W., Li V. Angiogeneze při hojení ran. Současná chirurgie. Doplněk k současné chirurgii. 2003; 36.
12. ↑ Azrin M. Angiogeneze, dodání proteinů a genů. British Medical Bulletin 2001; 59:211-25.
13. ↑ Sylven C. Angiogenní genová terapie. Drogy dneška. 2002; 38:819-27.
14. ↑ 1 2 3 Parfenova E. V., Tkachuk V. A. Terapeutická angiogeneze: úspěchy, problémy, vyhlídky. Kardiologický bulletin. 2007; 2:5-15.
15. ↑ Isner J., Vale P., Losordo D. a el. Angiogeneze a kardiovaskulární onemocnění. Dialogy v kardiovaskulární medicíně, 2001:3:145-70.
16. ↑ Grigoryan A.S., Shevchenko K.G. Možné molekulární mechanismy fungování plasmidových konstruktů obsahujících gen VEGF . Transplantace buněk a tkáňové inženýrství. 2011; 6 (3): 24-8.
17. ↑ 1 2 3 Deev R. V., Chervyakov Yu. V., Kalinin R. E. et al. Teoretické a praktické aspekty použití léku na bázi nukleové kyseliny kódující endoteliální vaskulární růstový faktor („Neovasculgen“). Angiologia.ru. 2011; jeden.
18. ↑ Meyer F., Finer M. Genová terapie: pokrok a výzvy. Cell Moi Biol (Noisy-le-grand). 2001; 47:1277-94.
19. ↑ Reshetov I.V., Zalyanin A.S., Filippov V.V., Kharkova N.V., Sukortseva N.S., Popov V.K., Mirtov A.V., Komlev V.S. Způsoby vitalizace bioinženýrských struktur pro obnovu pohybového aparátu (v rámci grantu RFBR na téma „Studium způsobů vaskularizace a inervace 3D individuálních implantátů pro obnovu pohybového aparátu“)  // Hlava a krk 1/2. - 2016. - Květen. - S. 55-59 . — ISSN 2310-5194 . Archivováno z originálu 27. června 2018.
20. ↑ Deev, R. V., Drobyshev, A. Yu., Bozo, I. Ya., Galetsky, D. V., Korolev, V. O., Eremin, I. I., ... & Isaev, A A. (2013). Vytvoření a vyhodnocení biologického působení genově aktivovaného osteoplastického materiálu nesoucího lidský gen VEGF Archivováno 26. června 2018 na Wayback Machine . Genes and Cells , 8 (3), 78-85.
21. ↑ Deev R.V., Kalinin R.E., Chervyakov Yu.V. Bulletin Národního lékařského a chirurgického centra. N. I. Pirogov. 2011; 4:20-5.

Literatura

1. Hockel M., Schlenger K., Doctrow S. a kol. Terapeutická angiogeneze. Arch Surg. 1993; 128:423-9.
2. Shvalb P. G., Gavrilenko A. V. , Kalinin R. E. et al. Účinnost a bezpečnost Neovasculgenu v komplexní terapii pacientů s chronickou ischemií dolních končetin (fáze IIb-III klinických studií). KTTI. 2011; 3:76-83.
3. Mzhavanadze N.D., Bozo I.Ya., Kalinin R.E., Deev R.V. Realita a vyhlídky použití genové terapie v kardiovaskulární chirurgii. CTTI 2012; 2:51-5.
4. Isner J., Walsh K., Symes J. a kol. Arteriální genová terapie pro terapeutickou angiogenezi u pacientů s onemocněním periferních tepen. oběh. 1995; 91:2687-92.
5. Isner J., Pieczek A., Schainfeld R., Blair R. a kol. Klinický důkaz angiogeneze po arteriálním genovém transferu phVEGF165 u pacienta s ischemickou končetinou. Lancet 1996 10. srpna;348(9024):370-4.
6. Baumgartner I., Rauh G., Pieczek A. et al. Edém dolních končetin spojený s přenosem genů holé DNA kódující vaskulární endoteliální růstový faktor. Ann Intern Med. 2000; 132(11):880-4.
7. Madeddu P. Terapeutická angiogeneze a vaskulogeneze pro regeneraci tkání. experimentální fyziologie. 2004; 90:315-26.
8. Mäkinen K. Angiogenesis — nový cíl v terapii okluzivního onemocnění periferních tepen. Acta Chir Belg. 2003; 103:470-4.
9. Malecki M., Kolsut P., Proczka R. Angiogenní a antiangiogenní genová terapie. Genová terapie. 2005; 12:159-69.
10. Li W., Li V. Angiogeneze při hojení ran. Současná chirurgie. Doplněk k současné chirurgii. 2003; 36.
11. Azrin M. Angiogeneze, dodání proteinů a genů. British Medical Bulletin 2001; 59:211-25.
12. Sylven C. Angiogenní genová terapie. Drogy dneška. 2002; 38:819-27.
13. Parfenova E. V., Tkachuk V. A. Terapeutická angiogeneze: úspěchy, problémy, vyhlídky. Kardiologický bulletin. 2007; 2:5-15.
14. Isner J., Vale P., Losordo D. a el. Angiogeneze a kardiovaskulární onemocnění. Dialogy v kardiovaskulární medicíně, 2001:3:145-70.
15. Grigoryan A.S., Shevchenko K.G. Možné molekulární mechanismy fungování plasmidových konstruktů obsahujících gen VEGF . CTTI 2011; 6 (3): 24-8.
16. Deev R. V., Chervyakov Yu. V., Kalinin R. E. et al. Teoretické a praktické aspekty použití léku založeného na nukleové kyselině kódující endoteliální vaskulární růstový faktor („Neovasculgen“). Angiologia.ru. 2011; jeden.
17. Meyer F., Finer M. Genová terapie: pokrok a výzvy. Cell Moi Biol (Noisy-le-grand). 2001; 47:1277-94.
18. Baumgartner I., Pieczek A., Manor O. a kol. Konstitutivní exprese phVEGF165 po intramuskulárním přenosu genu podporuje rozvoj kolaterálních cév u pacientů s kritickou ischemií končetiny. Circulation 1998; 97:1114-23.
19. Symes J., Losordo D., Vale P. a kol. Genová terapie vaskulárním endoteliálním růstovým faktorem pro inoperabilní onemocnění koronárních tepen. Ann Thorac Surg 1999; 68:830-36.
20. Fortuin F., Vale P., Losordo D. a kol. Jednoroční sledování přímého myokardiálního genového transferu vaskulárního endoteliálního růstového faktoru-2 pomocí nahého plazmidu deoxyribonukleové kyseliny cestou torakotomie u pacientů bez možnosti volby. Am J Cardiol. 2003; 92:436-9.
21. Reilly J., Grise M., Fortuin F. a kol. Dlouhodobé (2 roky) klinické příhody po transtorakálním intramyokardiálním genovém přenosu VEGF-2 u pacientů s noopcí. J Interv Cardiol. 2005; 18:27-31.
22. Vale P., Losordo D., Milliken C. a kol. Elektromechanické mapování levé komory pro hodnocení účinnosti přenosu genu phVEGF (165) pro terapeutickou angiogenezi u chronické ischemie myokardu. Náklad 2000; 102:965-74.
23. Sarkar N., Ruck A., Kallner G. a kol. Účinky intramyokardiální injekce phVEGF-A165 jako jediné terapie u pacientů s refrakterním onemocněním koronárních tepen – 12měsíční sledování: angiogenní genová terapie. J Intern Med. 2001; 250:373-81.
24. Losordo D., Vale P., Hendel R. a kol. Placebem kontrolovaná, dvojitě zaslepená, dávka eskalující studie fáze 1/2 přenosu genu myokardiálního vaskulárního endoteliálního růstového faktoru 2 katetrem u pacientů s chronickou ischemií myokardu. Výpůjčka 2002; 105:2012-18.
25. Gyongyosi M., Khorsand A., Zamini S. a kol. NOGA řízená analýza regionálních abnormalit perfuze myokardu léčených intramyokardiálními injekcemi plazmidu kódujícího vaskulární endoteliální růstový faktor A-165 u pacientů s chronickou ischemií myokardu: subanalýza multicentrické dvojitě zaslepené randomizované studie EUROINJECT-ONE. Výpůjčka 2005; 112 (Suppl): I157-I165.
26. Kastrup J., Jorgensen E., Ruck A. a kol. Přímá intramyokardiální terapie plasmidovým vaskulárním endoteliálním růstovým faktorem-A165 genová terapie u pacientů se stabilní těžkou anginou pectoris. Randomizovaná dvojitě zaslepená placebem kontrolovaná studie: Euroinject One Trial. J Am Call Cardiol. 2005; 45:982-8.
27. Stewart D., Kutryk M., Fitchett D. a kol. Genová terapie VEGF nezlepšuje perfuzi ischemického myokardu u pacientů s pokročilým koronárním onemocněním: výsledky studie NORTHERN. Mol. Ther. 2009; 17:1109-15.
28. Mendiz O., Favaloro L., Diez M. a kol. Abstrakt 15235: Vysokodávkový plazmidový přenos genu VEGF u pacientů s těžkou ischemickou chorobou srdeční: konečné výsledky první latinskoamerické studie genové terapie u ischemie myokardu. Náklad 2011; 124 (Suppl.): A15235.
29. Kusumanto Y., van Weel V., Mulder N. a kol. Léčba intramuskulárním genem pro vaskulární endoteliální růstový faktor ve srovnání s placebem u pacientů s diabetes mellitus a kritickou ischemií končetiny: dvojitě zaslepená randomizovaná studie. Hum Gene Ther 2006; 17:683-91.
30. Kukula K., Chojnowska L., Dabrowski M. et al. Intramyokardiální plazmid kódující lidský vaskulární endoteliální růstový faktor A165/ terapie základním fibroblastovým růstovým faktorem pomocí perkutánního transkatétrového přístupu u pacientů s refrakterním onemocněním koronárních tepen (VIF-CAD). Am Heart J 2011; 161:581-9.
31. Makinen K., Manninen H., Hedman M. a kol. Zvýšená vaskularita detekovaná digitální subtrakční angiografií po přenosu genu VEGF do lidské tepny dolní končetiny: randomizovaná, placebem kontrolovaná, dvojitě zaslepená studie fáze II. Mol Ther 2002; 6:127-33.
32. Hedman M., Hartikainen J., Syvanne M. a kol. Bezpečnost a proveditelnost katétrového lokálního přenosu genu intrakoronárního vaskulárního endoteliálního růstového faktoru v prevenci postangioplastiky a restenózy ve stentu a při léčbě chronické ischemie myokardu: výsledky II. fáze Kuopio Angiogenesis Trial (KAT). Výpůjčka 2003; 107:2677-83.
33. Rajagopalan S., Mohler III E., Lederman R. a kol. Regionální angiogeneze s vaskulárním endoteliálním růstovým faktorem (VEGF) u onemocnění periferních tepen: design studie RAVE. Am Heart J 2003; 145:1114-18.
34. Rosengart T., Lee L., Patel S. a kol. Genová terapie angiogeneze: fáze I hodnocení přímého intramyokardiálního podání adenovirového vektoru exprimujícího cDNA VEGF121 jedincům s klinicky významným závažným onemocněním koronárních tepen. Circulation 1999; 100:468-74.
35. Stewart D., Hilton J., Arnold J. a kol. Angiogenní genová terapie u pacientů s nerevaskularizovatelnou ischemickou chorobou srdeční: fáze 2 randomizovaná, kontrolovaná studie AdVEGF (121) (AdVEGF121) versus maximální medikamentózní léčba. Genová terapie 2006; 13:1503-11.
36. Kastrup J., Jorgensen E., Fuchs S. a kol. Randomizovaná, dvojitě zaslepená, placebem kontrolovaná, multicentrická studie bezpečnosti a účinnosti genové terapie BIOBYPASS (AdGVVEGF121.10NH) u pacientů s refrakterním pokročilým onemocněním koronárních tepen: studie NOVA. Euro intervence 2011; 6:813-18.
37. Ropper A., ​​​​Gorson K., Gooch C. a kol. Přenos genu pro vaskulární endoteliální růstový faktor pro diabetickou polyneuropatii: randomizovaná, dvojitě zaslepená studie. Ann Neurol 2009; 65:386-93.
38. Deev R. V., Kalinin R. E., Chervyakov Yu. V. et al. Výsledky použití léku pro genovou terapii "Neovasculgen" u pacientů s chronickou ischemií dolních končetin: 1 rok sledování. Bulletin Národního lékařského a chirurgického centra. N. I. Pirogov. 2011; 4:20-5.
39. Schwalb P. G., Kalinin R. E., Gryaznov S. V. et al. Bezpečnost a krátkodobá účinnost léku pro genovou terapii u pacientů s chronickou ischemií dolních končetin. Kardiologie a kardiovaskulární chirurgie. 2011; 4:61-6.