Lineweaver-Burkeův graf
Lineweaver-Burk plot , také Lineweaver-Burk nebo reciproční double plot , je grafická metoda pro reprezentaci Lineweaver-Burk rovnice, která charakterizuje kinetiku enzymu. Používá se v biochemii a enzymologii. Tuto metodu poprvé popsali Hans Lineweaver a Dean Burke v roce 1934 [1] .
Pro pohodlnější grafické znázornění experimentálních dat Lineweaver a Burke transformovali Briggs-Haldaneovu rovnici (odvození Michaelis-Mentenovy rovnice) podle metody dvojitých reciprokátů, založené na principu, že pokud existuje rovnost mezi libovolnými dvěma množství, pak budou reciproční také stejné.
Lineweaver-Burkův graf je správný, když enzymová kinetika sleduje kinetiku ideálních reakcí druhého řádu, ale nelineární regrese je nezbytná pro systémy, které se nechovají ideálně. Dvojitý inverzní graf zkresluje vzor datových chyb, a proto není nejpřesnějším nástrojem pro stanovení kinetických parametrů enzymů. K výpočtu parametrů se obvykle používá nelineární regrese nebo alternativní lineární formy Michaelis-Mentenovy rovnice , jako je Haynes-Wulffův graf nebo Eady-Hofsteyův graf [2] .
Závěr
Grafické znázornění rovnice Lineweaver-Burk je přímka, která odpovídá tvaru: y = ax + b. Převeďme Michaelis-Mentenovu rovnici do lineárního tvaru pro pohodlnější výpočet hodnot V max a K m . Zejména pokud:
,![{\displaystyle V={\frac {V_{\max }[S]}{K_{m}+[S]}}}](https://wikimedia.org/api/rest_v1/media/math/render/svg/8fa5b35e10661c7592ae5bc59429f1033a4acbf8)
pak
![{\displaystyle {1 \over V}={{K_{m}+[S]} \over V_{\max }[S]}={K_{m} \over V_{\max }}{1 \over [S]}+{1 \over V_{\max }}}](https://wikimedia.org/api/rest_v1/media/math/render/svg/262e1440a8ad30a692b153178eabbf6e7f45d48f)
která se nazývá Lineweaver-Burk rovnice.
Nyní, v souladu s touto rovnicí, můžete sestavit graf v souřadnicích 1/V (y) z 1/[S] (x) [3] , přičemž dostaneme přímku, tečnu úhlu sklonu, která bude být rovna hodnotě Km / Vmax ; segment odříznutý přímkou od osy y je 1/V max (převrácená hodnota maximální rychlosti). Budeme-li pokračovat po přímce za osou y, pak se na úsečce odřízne úsečka odpovídající převrácené hodnotě Michaelisovy konstanty -1 / K m . Hodnotu Km lze tedy vypočítat z údajů sklonu přímky a délky segmentu odříznutého od osy pořadnic, nebo z délky segmentu odříznutého od osy úsečky v oblasti záporu. hodnoty.
Poznámky
- ↑ Lineweaver, Hans; Burk, děkan (březen 1934). "Určení disociačních konstant enzymu" . Journal of the American Chemical Society ]. 56 (3): 658-666. DOI : 10.1021/ja01318a036 . ISSN 0002-7863 . Archivováno z originálu dne 2021-09-16 . Staženo 2021-10-04 . Použitý zastaralý parametr |deadlink=( nápověda )
- ↑ Greco, WR; Hakala, M. T. (1979-12-10). „Vyhodnocení metod pro odhad disociační konstanty inhibitorů enzymů s pevnou vazbou“. The Journal of Biological Chemistry . 254 (23): 12104-12109. DOI : 10.1016/S0021-9258(19)86435-9 . ISSN 0021-9258 . PMID 500698 .
- ↑ Christensen, Siegfried B.; DeWolf, Walter E.; Ryan, M. Dominic & Torphy, Theodore J. (1996-01-01), Schudt, Christian; Dent, Gordon & Rabe, Klaus F., eds., 13 - Molecular Aspects of Inhibitor Interaction with PDE4 , Handbook of Immunopharmacology, San Diego: Academic Press, str. 185–207, ISBN 978-0-12-210720-7 , doi : 10.1016/ b978-012210720-7 /50015-0 , < http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B270780 Staženo 15. prosince 2020. Archivováno 4. října 2021 na Wayback Machine
| Enzymy | |
|---|---|
| Aktivita | |
| Nařízení | |
| Klasifikace | |
| Typy |
|