Fragment z Klenova

Aktuální verze stránky ještě nebyla zkontrolována zkušenými přispěvateli a může se výrazně lišit od verze recenzované 26. prosince 2015; kontroly vyžadují 2 úpravy .

Klenowův fragment je velký  proteinový fragment, který je výsledkem enzymatického štěpení DNA polymerázy I z Escherichia coli proteázou subtilisinem. Klenowův fragment byl poprvé popsán v roce 1970 a měl 5' → 3' polymerázovou aktivitu v kombinaci s 3' → 5' exonukleázovou aktivitou (korektor), ale neměl 5' → 3' exonukleázovou aktivitu [1] .

Jiné menší fragmenty vzniklé enzymatickým štěpením mohly mít 5' → 3'-exonukleázovou aktivitu, ale postrádaly dvě aktivity charakteristické pro Klenowův fragment.

Klenowův fragment byl použit jako DNA polymeráza v prvních metodách polymerázové řetězové reakce [2] a teprve po nějaké době byl nahrazen termostabilní Taq polymerázou [3] .

V současnosti se používá pro značení DNA ("doplňte" 3' krátké konce "náhodnými hexamery"), pro sekvenování DNA Sangerovou metodou a pro syntézu druhého vlákna DNA .

Poznámky

  1. ↑ Klenow H a Henningsen I. Selektivní eliminace exonukleázové aktivity polymerázy deoxyribonukleové kyseliny z Escherichia coli B omezenou proteolýzou   // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  : journal. - 1970. - Sv. 65 . - S. 168-175 . - doi : 10.1073/pnas.65.1.168 . — PMID 4905667 .
  2. ↑ Saiki R. K. a kol. Enzymatická amplifikace genomových sekvencí β-globinu a analýza restrikčního místa pro diagnostiku srpkovité anémie  (anglicky)  // Science : journal. - 1985. - Sv. 230 . - S. 1350-1354 . - doi : 10.1126/science.2999980 . — PMID 2999980 .
  3. ↑ Saiki a kol. Primerem řízená enzymatická amplifikace DNA pomocí termostabilní DNA polymerázy  (anglicky)  // Science : journal. - 1988. - Sv. 239 . - str. 487-491 . - doi : 10.1126/science.2448875 . — PMID 2448875 .