Fragment z Klenova
Aktuální verze stránky ještě nebyla zkontrolována zkušenými přispěvateli a může se výrazně lišit od
verze recenzované 26. prosince 2015; kontroly vyžadují
2 úpravy .
Klenowův fragment je velký proteinový fragment, který je výsledkem enzymatického štěpení DNA polymerázy I z Escherichia coli proteázou subtilisinem. Klenowův fragment byl poprvé popsán v roce 1970 a měl 5' → 3' polymerázovou aktivitu v kombinaci s 3' → 5' exonukleázovou aktivitou (korektor), ale neměl 5' → 3' exonukleázovou aktivitu [1] .
Jiné menší fragmenty vzniklé enzymatickým štěpením mohly mít 5' → 3'-exonukleázovou aktivitu, ale postrádaly dvě aktivity charakteristické pro Klenowův fragment.
Klenowův fragment byl použit jako DNA polymeráza v prvních metodách polymerázové řetězové reakce [2] a teprve po nějaké době byl nahrazen termostabilní Taq polymerázou [3] .
V současnosti se používá pro značení DNA ("doplňte" 3' krátké konce "náhodnými hexamery"), pro sekvenování DNA Sangerovou metodou a pro syntézu druhého vlákna DNA
.
Poznámky
- ↑ Klenow H a Henningsen I. Selektivní eliminace exonukleázové aktivity polymerázy deoxyribonukleové kyseliny z Escherichia coli B omezenou proteolýzou // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. - 1970. - Sv. 65 . - S. 168-175 . - doi : 10.1073/pnas.65.1.168 . — PMID 4905667 .
- ↑ Saiki R. K. a kol. Enzymatická amplifikace genomových sekvencí β-globinu a analýza restrikčního místa pro diagnostiku srpkovité anémie (anglicky) // Science : journal. - 1985. - Sv. 230 . - S. 1350-1354 . - doi : 10.1126/science.2999980 . — PMID 2999980 .
- ↑ Saiki a kol. Primerem řízená enzymatická amplifikace DNA pomocí termostabilní DNA polymerázy (anglicky) // Science : journal. - 1988. - Sv. 239 . - str. 487-491 . - doi : 10.1126/science.2448875 . — PMID 2448875 .
replikace DNA |
---|
Zahájení | prokaryota |
|
---|
Eukaryota |
- Ori rozpoznávací komplex
- ORC1
- ORC2
- ORC3
- ORC4
- ORC5
- ORC6
- Cdc6
- cdt1
- Komplex údržby minichromozomů
- MCM2
- MCM3
- MCM4
- MCM5
- MCM6
- MCM7
|
---|
Společné pro pro- a eukaryota |
|
---|
|
---|
Prodloužení | prokaryota |
|
---|
eukaryota |
|
---|
Společné pro pro- a eukaryota |
|
---|
|
---|
Ukončení |
|
---|