Infračervená spektroskopie

Infračervená spektroskopie ( vibrační spektroskopie , střední infračervená spektroskopie , IR spektroskopie , IR ) je obor spektroskopie , který studuje interakci infračerveného záření s látkami .

Při průchodu infračerveného záření látkou dochází k vybuzení vibračních pohybů molekul nebo jejich jednotlivých fragmentů . V tomto případě je pozorován pokles intenzity záření procházejícího vzorkem. K absorpci však nedochází v celém spektru dopadajícího záření, ale pouze na těch vlnových délkách , jejichž energie odpovídá excitačním energiím vibrací ve zkoumaných molekulách. Proto vlnové délky (nebo frekvence), při kterých je pozorována maximální absorpce IR záření, mohou naznačovat přítomnost určitých funkčních skupin a jiných fragmentů v molekulách vzorku , což je široce používáno v různých oblastech chemie ke stanovení struktury sloučenin.

Experimentálním výsledkem v IR spektroskopii je infračervené spektrum , funkce intenzity procházejícího infračerveného záření jako funkce jeho frekvence. Infračervené spektrum obvykle obsahuje řadu absorpčních pásů, z jejichž polohy a relativní intenzity se vyvozuje závěr o struktuře zkoumaného vzorku. Tento přístup se stal možným díky velkému množství nashromážděných experimentálních informací: existují speciální tabulky, které spojují absorpční frekvence s přítomností určitých molekulárních fragmentů ve vzorku. Rovněž byly vytvořeny databáze IR spekter některých tříd sloučenin, které umožňují automaticky porovnávat spektrum neznámého analytu s již známými a tak tuto látku identifikovat.

Infračervená spektroskopie je cenná analytická metoda a používá se ke studiu struktury organických molekul , anorganických a koordinačních , jakož i makromolekulárních sloučenin . Hlavním přístrojem používaným pro takové analýzy je infračervený spektrometr (disperzní nebo Fourierova transformace ).

Analýza komplexních vzorků byla umožněna vývojem nových technik infračervené spektroskopie: IR reflexní spektroskopie , IR emisní spektroskopie a IR mikroskopie . Infračervená spektroskopie byla navíc kombinována s dalšími analytickými metodami: plynovou chromatografií a termogravimetrií .

Historie metody

Infračervené záření objevil v roce 1800 astronom William Herschel . Pomocí hranolu pozoroval zvýšení teploty v oblasti za červeným koncem viditelného spektra. V letech 1882-1900 William Abney a Edward Festing zaznamenali infračervená spektra 52 sloučenin a porovnali pozorované absorpční pásy s funkčními skupinami přítomnými v těchto molekulách. Významně k metodě přispěl americký fyzik William Koblenz , který od roku 1903 pomocí hranolu chloridu sodného získával velmi přesná a úplná IR spektra pro stovky organických a anorganických látek [1] [2] .

První experimenty se záznamem infračervených spekter byly extrémně časově náročné, protože výzkumníci byli nuceni sestavit vlastní zařízení, brousit a leštit hranoly, stříbrná zrcadla a kalibrovat zařízení podle indexů lomu kamenné soli . Spektrometry byly zároveň citlivé na vibrace, proto byly umístěny na základ a studie probíhaly v noci. Doba registrace pro jedno spektrum byla od 3 do 4 hodin. Již v raných pracích se ukázalo, že IR spektra sloučenin mají individuální formu [1] .

V té době nebyla povaha absorpce infračerveného záření zcela jasná, ale ve 30. letech 20. století byla vytvořena teorie, v níž se věřilo, že tato absorpce je způsobena vibracemi molekul a že povaha této absorpce nějak souvisí s změna dipólového momentu , výběrová pravidla , symetrie molekul a stupeň anharmoničnosti vibrací [2] .

V roce 1940 Dow Chemical a American Cyanamid vytvořily své vlastní jednopaprskové přístroje pro studium uhlovodíků . Komerční spektrometry se začaly vyrábět v roce 1946 ve spolupráci American Cyanamid s Perkin-Elmer . Dostupnost přístrojů vedla k vytvoření rozsáhlých tabulek korelací pozorovaných absorpčních pásem se strukturou absorpčních funkčních skupin [3] .

Po druhé světové válce bylo možné zesílit slabý signál IR spektrometrů, což zkrátilo dobu experimentu na 1–2 hodiny. Poté byla zdokonalena technika výroby termoelektrických přijímačů s krátkou dobou odezvy. Tyto vylepšené detektory umožnily vyhnout se časovému posunu a vedly k vytvoření dvoupaprskových přístrojů, kde byla stupnice kalibrována v procentech propustnosti proti stupnici vlnových délek nebo vlnových čísel [1] .

Bylo možné průmyslově získat velké a vysoce kvalitní krystaly halogenidu alkalických kovů , které jsou nezbytné pro vytvoření optických prvků zařízení, což umožnilo překonat mnoho obtíží. Například syntetický bromid draselný , na rozdíl od dříve používané kamenné soli , umožňoval zaznamenat IR spektra až do 400 cm– 1 , zatímco dřívější limit byl 650 cm – 1 [4] .

Rozkvět IR spektroskopie byl příchod IR interferometrů , které byly původně používány k detekci velmi slabého infračerveného záření z astronomických objektů. Po vývoji rychlých metod převodu interferogramů na spektra ( Fourierova transformace ) a zkrácení doby skenování se začala sériově vyrábět taková zařízení, která v 70. letech umožnila vstup firmám, které vyráběly počítače, ale neměly v oboru spektroskopie žádné zkušenosti. trh IR spektrometrů ( Nicolet , Bruker ). Výhodou IR interferometrů byla jejich multiplexnost ( Felgettova výhoda ), tedy současný sběr absorpční informace všech vlnových délek, díky čemuž bylo dosaženo vyššího poměru signálu k šumu po dobu fixního skenování spektra. Druhou výhodou byl výkon nového typu přístrojů: zatímco disperzní přístroje měly vstup a výstup omezující množství světla, které jimi prošlo, výkon interferometru byl určován tloušťkou světelného paprsku ze zdroje. Je pravděpodobné, že móda také hrála významnou roli v rozšíření IR spektrometrů s Fourierovou transformací, protože v té době nebyla velká potřeba vysokého poměru signálu k šumu: vzorky obvykle trvaly mnohem déle, než bylo provedeno měření. a hmotnost vzorků byla dostatečná pro záznam vysoce kvalitních spekter [5] .

IR interferometry umožnily získat spektra ve vzdálené IR oblasti, pozorovat mřížkové vibrace krystalů a také díky vysokému poměru signálu k šumu překonat obtíže při interpretaci spekter organických sloučenin. Jednou z populárních činností v té době bylo digitální zpracování spekter, a to odstraňování absorpčních pásů rozpouštědel, stanovení stupně čistoty a charakteru nečistot. Interferometry našly široké uplatnění při studiu vodných roztoků biologických molekul [6] .

V 80. letech se objevily kombinované metody, které spojovaly plynovou chromatografii a IR spektroskopii. Velké podlahové spotřebiče byly nahrazeny kompaktnějšími stolními modely. Existovala možnost postupného snímání v čase, což umožnilo studovat dynamické procesy se sběrem dat v jednom bodě [6] .

Princip metody

Základní charakteristiky infračerveného záření

IR spektroskopie je založena na jevu absorpce infračerveného záření chemickými látkami za současného buzení molekulárních vibrací. Infračervené záření je elektromagnetické vlnění a je charakterizováno vlnovou délkou λ, frekvencí a vlnovým číslem , které spolu souvisí následujícím vztahem:

kde c je rychlost světla a n je index lomu média [7] .

V absorpční spektroskopii, jejíž speciálním případem je IR spektroskopie, jsou molekulami absorbovány fotony určité energie, která souvisí s frekvencí elektromagnetické vlny prostřednictvím Planckovy konstanty :

Při pohlcení fotonu dochází k excitaci - zvýšení energie molekuly: přechází ze základního vibračního stavu E 1 do nějakého excitovaného vibračního stavu E 2 tak, že energetický rozdíl mezi těmito hladinami je roven energii fotonu. [7] .

Energie absorbovaného infračerveného záření se vynakládá na excitaci vibračních přechodů pro látky v kondenzovaném stavu. U plynů vede absorpce kvanta infračerveného záření k vibračním a rotačním přechodům [7] .

Typy a energie vibrací molekul

Vibrační pohyby molekul jsou určeny jejich vnitřními neboli vibračními stupni volnosti. Počet vibračních stupňů volnosti a jim odpovídající normální [K 1] vibrace je (3 n –5) pro lineární molekuly a (3 n –6) pro nelineární molekuly, kde n je počet atomů v molekule [K 2 ] . Například molekula vody H 2 O je nelineární a má 3 vibrační stupně volnosti, zatímco lineární molekula vodíku H 2 má pouze jeden [8] [9] .

Molekulární vibrace mohou spočívat ve změně délek vazeb ( natahovací vibrace, v ) nebo úhlů mezi vazbami ( ohybové vibrace, δ). Vibrace natahování mohou být symetrické a antisymetrické a ohybové vibrace se dělí na vibrace nůžkové , kyvadlové , ventilátorové a torzní . U složitějších molekul, u kterých je jedna z deformačně-vibrujících částí mnohem hmotnější než druhá, se deformační vibrace častěji popisují jako v rovině a mimo rovinu . Vibrace, které spočívají v současné změně několika délek vazby nebo úhlů vazby, se nazývají skeletové [10] .

Natahovací vibrace Deformační oscilace
symetrický antisymetrický rovinný mimo letadlo
nůžkový

(nůžky)

kyvadlo

(houpání)

fanoušek

(vrtání)

torzní

(kroucení)

Molekulární vibrace lze popsat pomocí modelů harmonických a anharmonických oscilátorů . Z hlediska modelu harmonického oscilátoru jsou dvouatomovou molekulou dvě hmoty m 1 a m 2 spojené elastickou pružinou, která nemá žádnou hmotnost, se silovou konstantou K. V tomto případě je vibrační frekvence atomů takové molekuly podél linie procházející středy jejich hmot [11] :

Z těchto výrazů vyplývá, že pozorovaná frekvence kmitání dvouatomového oscilátoru závisí na silové konstantě K , která zase souvisí s vazebnou energií mezi dvěma atomy, jakož i na hmotnosti atomů účastnících se kmitání. U víceatomových molekul jsou vibrace složitější a aproximace harmonickým oscilátorem je nepoužitelná [11] .

Potenciální energie harmonického oscilátoru souvisí s odchylkou vzdálenosti mezi atomy X takto [11] :

Graf potenciální energie je parabola, symetrická podle počáteční polohy atomů v klidu (re ) . Podle kvantové mechaniky jsou energetické stavy molekuly kvantovány, to znamená, že jsou diskrétní . Takové kvantované stavy se nazývají vibrační úrovně. Vibrační úrovně jsou od sebe ve stejné vzdálenosti a jejich energii lze vypočítat z rovnice [11]

Při v i = 0 je molekula na nejnižší vibrační úrovni a vibrační energie v tomto stavu je rovna E = ½ hν. Tato energie je vždy vlastní molekule a nelze ji odebrat. V aproximaci harmonického oscilátoru jsou povoleny pouze přechody s Δ v = ±1, tedy pouze do sousedních úrovní (pravidlo výběru) [11] .

Přesnější je model anharmonického oscilátoru . Anharmonicita se projeví, pokud se hodnota dipólového momentu nemění úměrně s posunem atomů. Rozdíl tohoto modelu je v tom, že vzdálenost mezi vibračními úrovněmi klesá s rostoucím číslem úrovně. Odchylka od harmonie se také zvyšuje zdola nahoru. Energie hladiny v případě anharmonického oscilátoru je vyjádřena následovně [11] :

Anharmonicita vibrací vede ke snížení závažnosti selekčního pravidla, v důsledku čehož lze ve spektrech pozorovat přechody s Δ v = ±2 - podtóny . Frekvence podtónu spadá zpravidla do oblasti 2×ν 1 - b , kde b = 2-10 cm −1 . Je také možné, že se objeví kombinovaná nebo složená pásma s frekvencí v 1 + v 2 , kde v 1 a v 2 jsou frekvence některých základních vibrací molekuly. Kombinovaný pás se objevuje při vibračních přechodech z excitovaných stavů. Obvykle je pro kondenzovaný stav intenzita podtónů a kombinačních pásem 10–100krát nižší než u hlavních, i když mohou existovat výjimky [12] .

Pokud se podtón nebo kombinační pásmo frekvenčně shoduje s jakoukoli základní vibrací, objeví se Fermiho rezonance , která vede ke vzniku dvou absorpčních pásem přibližně stejné intenzity, přičemž se očekává pouze jeden základní pás. Někdy také dochází ke smíchání vibrací s přibližně stejnou frekvencí: počet vibrací sice zůstává stejný, ale objevují se na různých frekvencích a nelze je již přisuzovat pouze jednomu spojení. Komplikujícím faktorem je také výskyt ve spektrech jemné struktury odpovídající rotačním přechodům (tento jev je pozorován pouze u látek v plynném stavu) [10] .

Charakteristické vibrace

Polyatomické molekuly mají 3 n -6 (5) normálních vibrací a každá taková vibrace nezahrnuje páry atomů s jednou vazbou, ale do té či oné míry všech n atomů molekuly. Experimentálně však bylo zjištěno, že pro vibrace některých funkčních skupin je příspěvek „cizích“ atomů a vazeb poměrně malý, proto tyto funkční skupiny bez ohledu na prostředí absorbují v omezeném frekvenčním rozsahu. Tato skutečnost umožnila porovnáním četných spekter korelovat přítomnost charakteristických fragmentů v molekule s pozorovanými absorpčními pásy. Takové pásy se nazývají skupinové nebo charakteristické . Pomocí nich lze rychle a jednoznačně potvrdit přítomnost nebo nepřítomnost odpovídajících fragmentů v molekule [13] .

Výskyt charakteristických kmitů může nastat ze dvou důvodů [14] :

  1. Pokud se charakteristická vibrace vztahuje k lehkému atomu spojenému s těžkým, pak se na něj soustředí prakticky veškerý pohyb a vliv zbytku molekuly na něj je velmi slabý.
  2. Vibrace související s atomy o velmi blízké hmotnosti (například C=O, C≡N) slabě interagují s vibracemi jiných částí molekuly.

Existují také méně definované charakteristické oscilace, které jsou pozorovány v poměrně širším rozsahu frekvencí. Jejich polohu ve spektru však lze vysvětlit hmotností atomů, rezonancí nebo elektronovými efekty v molekule [14] .

Absorpce záření

Obvykle v experimentu zařízení vysílá současně všechny vlnové délky infračerveného záření, včetně blízké IR oblasti (14000 - cm400), střední IR oblasti (4000 --14000 cm ). Absorpce záření látkou je kvantitativně popsána Bouguer-Lambert-Beerovým zákonem a spektrum se získá sestrojením závislosti prostupu ( T , anglicky transmittance , %) nebo optické hustoty ( D , anglickyoptic density ) na vlnová délka (frekvence, vlnové číslo) [15 ] .   

Aby došlo k absorpci záření, musí být splněny dvě podmínky. Nejprve jsou absorbovány pouze vlny o frekvenci, která se shoduje s frekvencí té či oné vibrace molekuly. Za druhé, vibrace musí způsobit změnu dipólového momentu molekuly. Z tohoto důvodu molekuly, které nemají dipólový moment (například H 2 , N 2 , O 2 , stejně jako soli bez kovalentních vazeb a kovy), infračervené záření neabsorbují. Intenzita pásů v IR spektru je úměrná druhé mocnině změny dipólového momentu [15] [16] .

IR spektrometry

Disperzní IR spektrometry

U disperzních IR spektrometrů může roli monochromátoru plnit hranol nebo u novějších modelů přístrojů difrakční mřížka . Obvykle je v optickém schématu monochromátor umístěn za kyvetou s analytem, ​​to znamená, že záření, které interagovalo se vzorkem, je rozloženo do spektra. V tomto případě se intenzita záření zaznamenává postupně pro každou vlnovou délku záření, což dává absorpční spektrum. Podél dráhy záření je instalována štěrbina nastavitelné šířky, která umožňuje vyčlenit určitý spektrální interval pro provoz (obvykle od 20 do 0,5 cm −1 ) [17] .

Nejčastěji používané dvoupaprskové disperzní IR spektrometry. V tomto případě je zdrojové záření rozděleno na dvě části, z nichž jedna prochází analyzovaným vzorkem a druhá referenčním vzorkem (čisté rozpouštědlo nebo tableta bromidu draselného bez vzorku). Tyto dva paprsky střídavě dopadají na detektor, kde vytvářejí signály různé intenzity. Jejich poměr udává hodnotu přenosu T [17] .

Spektrometry s Fourierovou transformací

Hlavní součástí Fourierových IR spektrometrů je Michelsonův interferometr , známý od konce 19. století. Jeho klíčovým prvkem jsou tři zrcadla. Zrcadlo rozdělující paprsek (deska) rozděluje paprsek záření na dvě části, z nichž jedna se odráží od pevného zrcadla a druhá od pohyblivého (skener). Oba odražené paprsky pak opět dopadají na zrcadlo dělící paprsky, kde jsou spojeny a směrovány do detektoru (fotodetektoru). Pohyblivé zrcadlo je navrženo tak, aby vytvořilo rozdíl optické dráhy ( rozdíl dráhy ) pro dva paprsky světla. Při rozdílu drah procházejících paprsků se vzájemně ruší, odražené paprsky se naopak zesilují. Výsledkem je interferogram - graf závislosti intenzity registrovaného záření na rozdílu dráhy paprsků. Pro monochromatické světlo má tvar kosinusové vlny. Pro polychromatické světlo používané v IR spektroskopii získává složitější podobu a obsahuje veškeré spektrální informace o paprsku dopadajícím na detektor. Dále je interferogram přepočítán do infračerveného spektra pomocí Fourierovy transformace [18] [19] .

Výhoda takových zařízení je následující: [20]

V důsledku toho je doba záznamu spektra výrazně zkrácena: spektrometry s Fourierovou transformací umožňují zaznamenat až 50 spekter za sekundu, zatímco disperzní přístroj potřebuje k záznamu jednoho spektra asi 20 minut. Kvalita spekter a citlivost analýzy jsou také zlepšeny (o 2-3 řády) díky použití akumulačního módu [K 3] . FT-IR spektrometry jsou většinou jednopaprskové, což znemožňuje záznam spektra s referenčním vzorkem. Z tohoto důvodu také není možné kompenzovat „atmosférické“ rušení (přítomnost oxidu uhličitého a vody). Obvykle se tato nevýhoda odstraňuje záznamem dvou po sobě jdoucích spekter s odečtením spektra referenčního vzorku od spektra analyzovaného vzorku, nicméně v poslední době jsou populární i dvoupaprsková zařízení [18] .

IR transmisní spektroskopie

Organické sloučeniny

Vibrační spektra organických sloučenin mají obvykle složitou strukturu a obsahují velké množství pásů různého tvaru a intenzity. Experimentálně bylo zjištěno, že přítomnost určitých pásů v určité oblasti spektra indikuje přítomnost odpovídajících funkčních skupin v molekule . Žádná skupina však není zcela izolovaná od vibrací zbytku molekuly. To vede k určitým změnám ve frekvenci a intenzitě pásem v závislosti na chemickém prostředí funkční skupiny [21] .

Analýza IR spekter mnoha tisíc organických sloučenin umožnila sestavit korelační tabulky, které spojují funkční skupiny s frekvencí a intenzitou vibrací. Obvykle se však ve spektrech organických sloučenin vyskytují i ​​absorpční pásy, které nelze korelovat se specifickými vibracemi [21] .

Vibrace vazeb X–H, kde X: C , O nebo N , lze přibližně popsat jako vibrace dvouatomové molekuly. V tomto případě je redukovaná hmotnost μ vždy blízká 1 a hodnota silové konstanty K je pro všechny takové vazby přibližně stejná, takže oscilace X–H se objevují přibližně ve stejném frekvenčním rozsahu. Například pro vazbu C–H je silová konstanta asi 490 N /m, což dává frekvenci 3000 cm −1 . U vazeb O–H a N–H je hodnota frekvence obvykle mírně vyšší kvůli vyšším hodnotám K [21] .

Pro vazby X–X' je redukovaná hmotnost mnohem vyšší, například pro vazbu C–O je 6,86. Protože silová konstanta je přibližně stejná jako u vazby C–H (obě vazby jsou jednoduché), frekvence kmitů C–O by měla být √6,86krát nižší než 3000 cm – 1 , tedy 1150 cm – 1 . Podobné úvahy platí pro vícenásobné dluhopisy. Například silová konstanta vazby C=O je přibližně dvakrát vyšší než silová konstanta vazby C–O, a proto je odhadovaná frekvence její vibrace 1600 cm – 1 (skutečná průměrná hodnota je 1700 cm– 1 ). Trojné vazby jsou pevnější než vazby dvojné a jejich vibrace jsou pozorovány v rozmezí 2300–2100 cm – 1 [21] .

Silové konstanty pro ohybové vibrace jsou nižší než pro odpovídající natahovací vibrace, takže se objevují při nižších frekvencích. Například vibrace skupin XH 2 spadají do oblasti 1500 cm – 1 , skupiny XYH spadají do oblasti od 1500 do 1 000 cm – 1 a skupiny XYZ (všechny atomy jsou relativně těžké) spadají do oblasti pod 1000 cm– 1 [21] .

Spektrum lze tedy rozdělit do čtyř oblastí:

Izotopová substituce vede k posunu frekvence oscilací a experimentálně pozorovaný posun obvykle dobře souhlasí s vypočítaným. Teoreticky by náhrada atomu vodíku deuteriem měla vést ke změně frekvence √2 = 1,414krát, ale v praxi tento posun závisí také na typu vibrace, například u symetrického natahování a vibrací kyvadla je faktor změny 1,379krát , pro asymetrické protažení - 1,349 krát, pro rovinnou deformaci - 1,349 krát, pro ventilátor - 1,323 krát a pro torzní - 1,414 krát. Rovněž je pozorována odchylka od vypočtených parametrů v důsledku mírného zkrácení délky vazby při substituci těžším izotopem, např. pro molekuly H 35 Cl a D 35 Cl jsou rovnovážné vzdálenosti mezi středy atomů 1,2837 resp. 1,2813 Á [K 4] [22] .

Anorganické, koordinační a organokovové sloučeniny

Typ infračerveného spektra anorganické sloučeniny závisí především na jejím stavu agregace . U plynných vzorků je možný projev jemné rotační struktury díky přechodu mezi rotačními stavy. Při přechodu do kapalných vzorků rotační přechody mizí kvůli vysoké frekvenci molekulárních srážek v roztocích. Také v kondenzovaných látkách se níže objevují nové absorpční pásy při frekvencích pod 300 cm −1 , které odpovídají vibracím mřížky [23] .

V oblasti blízkého infračerveného záření (12500–4000 cm– 1 ) se obvykle objevuje mnoho pásů, které odpovídají podtextům fundamentálních nebo složených vibrací. U středního IR záření se rozlišuje oblast skupinové frekvence (4000–1300 cm– 1 ) a oblast otisku prstu (1300–650 cm– 1 ). V první oblasti se projevují skupinové vibrace, přisuzované některým párům atomů molekuly: od 4000 do 2500 cm −1 - vibrace za účasti atomů vodíku, od 2500 do 2000 cm -1 - vibrace trojných vazeb, od r. 2000 až 1540 cm -1 - vibrace dvojné vazby. V oblasti otisků prstů dochází k deformacím a kosterním vibracím víceatomových systémů [23] .

Vzdálená IR oblast (od 667 do 10 cm– 1 ) obsahuje ohybové vibrace uhlíku, dusíku, kyslíku a fluoru, které jsou spojeny s atomy o hmotnosti nad 19 amu. e. m. , stejně jako deformační oscilace cyklických a nenasycených systémů. Vibrace v této oblasti jsou obzvláště citlivé na chemické prostředí a mohou být použity k vytvoření struktury izomerů . Tato oblast je také užitečná při studiu organokovových sloučenin , protože vibrační frekvence silně závisí na komplexotvorném atomu [23] .

Makromolekulární sloučeniny

Na rozdíl od nízkomolekulárních sloučenin jsou polymery složeny z dlouhých řetězců. To vede k tomu, že u nich lze pozorovat další absorpční pásy, které souvisí s vibracemi celých řetězců [24] .

Získání IR spekter pro makromolekulární sloučeniny je obtížné, protože silně absorbují IR záření. Aby optická hustota spadala do přípustných mezí, podle Bouguer-Lambert-Beerova zákona je nutné, aby tloušťka polymeru byla asi 5 mikronů. Materiál této tloušťky lze získat v laboratoři, ale běžné materiály jsou mnohem tlustší, takže k analýze polymerů se používají techniky jako frustrovaný úplný vnitřní odraz (ATR) a externí reflexní spektroskopie. Efektivní optická dráha v těchto metodách je mnohem menší (1 µm nebo méně) [24] .

Typicky je struktura polymeru stanovena pomocí kombinovaných metod IR spektroskopie a Ramanovy spektroskopie . První poskytuje informaci o funkčních skupinách s velkým dipólovým momentem (C–H, C=O), zatímco druhý je citlivý na polarizovatelné skupiny obsažené v makromolekulárních řetězcích (C–C, C=C). Pomocí IR spekter lze určit počet koncových funkčních skupin ve vzorku vysokomolekulární sloučeniny a odhadnout její molekulovou hmotnost. IR spektroskopie také pomáhá identifikovat složky v kopolymerech , stejně jako nízkomolekulární přísady a nečistoty. To je zvláště důležité v průmyslu při identifikaci a stanovení vlastností polymeru. Pomocí vhodných databází, se kterými strojový algoritmus porovnává zachycené IR spektrum, lze tento postup provádět rutinně. Signály v IR spektru také určují stupeň větvení polymerů a jejich stereoregularitu , krystalinitu nebo amorfismus polymerů [24] .

Příprava vzorku

Registrace spekter kapalných látek se obvykle provádí z tenkých filmů umístěných mezi skly vyrobenými z materiálů propouštějících IR záření. Pro organické látky se běžně používá bromid draselný . Pro vodné roztoky lze použít selenid zinečnatý , který má široké spektrální propustné okno, avšak jeho vysoký index lomu vede k výskytu interferenčních proužků , což ztěžuje kvantifikaci. Může být nahrazen fluoridem vápenatým a fluoridem barnatým . Halogenidová skla alkalických kovů se ve vlhké atmosféře rychle zakalí a snadno se poškrábou, ale lze je snadno přelakovat [25] .

Existují tři způsoby záznamu spekter kapalin: v kyvetách s pevnými nebo odnímatelnými distančními vložkami (mezery mezi skla) nebo z filmu přímo mezi skly. Pro kvantitativní měření je vhodnější použít fixní buňky, kde spacer je amalgám , který poskytuje konstantní optickou dráhu. U skládacích článků tuto funkci plní těsnění z kovové fólie nebo teflonu . Skla v takových buňkách lze rozebrat pro čištění nebo změnu délky optické dráhy. Obvykle se optická dráha po opětovném sestavení mírně změní, ale lze ji snadno přepočítat z interferenčních proužků. Tloušťka mezery mezi sklenicemi prázdné buňky se vypočítá jako (2 × vzdálenost mezi pruhy) −1 . Podle třetího způsobu může být kapka tekutiny umístěna na jednu sklenici a přitlačena k druhé. V tomto případě je optická dráha regulována působící silou. To je vhodné pro kvantitativní odhady, ale nepohodlné pro těkavé látky [25] .

Pokud je vzorek nestabilní nebo se snadno odpařuje, lze k záznamu spektra použít vodou chlazené kyvety. Volba takové kyvety může být zásadní v případě zařízení s vysokým výkonem infračerveného záření [26] .

Jedním ze způsobů záznamu spekter kapalných látek je také jejich rozpouštění ve vhodném rozpouštědle. Obvykle se pro tento účel nepoužívá voda, protože je nekompatibilní s mnoha optickými materiály a silně absorbuje v IR oblasti. Nejlepší je použít rozpouštědla sestávající ze symetrických molekul, protože poskytují minimální počet pásů v infračerveném spektru. Zvláštní význam v tomto smyslu mají sirouhlík a tetrachlormethan [26] .

K získání spektra pevných látek je třeba je rozemlít na jemný prášek a dispergovat v matrici. Jako matrice se obvykle používá bromid draselný: v množství 200–300 mg se smíchá se vzorkem (1–2 mg), rozemele (pro získání vysoce kvalitních spekter je žádoucí, aby velikost částic nepřesahovala vlnová délka záření), evakuována, aby se odstranila voda, a ručně lisován hydraulickým lisem (obvykle s kapacitou 15 nebo 25 tun) do malé tablety o průměru 13 mm a tloušťce 1 mm. Bromid draselný lze před použitím zahřát na 40°C, aby na něm nekondenzovala voda, která se i v minimálním množství objevuje ve spektru jako pásy při 3450 a 1640 cm– 1 . Výhodou tohoto přístupu je, že bromid draselný neabsorbuje v oblasti nad 400 cm −1 . Také rozpustné látky lze na sklo aplikovat ve formě roztoku, po kterém lze rozpouštědlo odstranit pod infračervenou lampou [25] [27] .

Jako alternativní matricový materiál slouží vazelínový olej ( nujol Vzorek se v tomto případě připraví rozemletím v hmoždíři s několika kapkami tohoto oleje. Výsledná směs se umístí do skládací kyvety a poté se zaznamená spektrum. Signály nečistot z matrice jsou signály skupin CH3- a CH2- . Signály v oblasti 3000 cm −1 lze pozorovat pomocí matrice fluorovaných uhlovodíků ( fluorolube ) [28] .

Pokud je vzorek tenký homogenní materiál, zaznamená se spektrum v procházejícím infračerveném záření po fixaci vzorku ve speciálním držáku. Jedná se o desku s obdélníkovým otvorem, ke kterému se přitlačí vzorek, shora krytou magnetickou deskou s otvorem ve středu [26] .

IR měření pro plynné látky vyžadují mnohem delší optické dráhy, typicky 10 cm při dostatečně vysoké koncentraci. V případě stopových koncentrací se používají systémy s více odrazy, které poskytují optickou dráhu v řádu několika metrů při malé velikosti přístroje. V tomto případě je mez detekce pod 1 ppm [25] Znakem spektroskopie plynných vzorků je projev rotačního pohybu molekul a také rozšíření spektrálních čar vlivem tepelného pohybu a kolize částic. . S tímto typem spektroskopie je spojena řada dalších problémů, například díky velmi velké délce optické dráhy začíná hrát významnou roli divergence světelného paprsku, díky čemuž se objevuje dodatečný rozdíl dráhy mezi středové a krajní nosníky nosníku [29] .

IR reflexní spektroskopie

Tradiční infračervená spektroskopie zkoumá spektrum záření, které prošlo vzorkem. Existují také metody pro studium infračerveného záření odraženého od povrchu vzorku. Jsou založeny na:

Významnou výhodou těchto metod je, že je možné studovat vzorky, které jsou neprůhledné pro infračervené záření, stejně jako upustit od procesu přípravy vzorku a provádět analýzu přímo v terénu. Navíc jsou takové analýzy nedestruktivní [30] .

ATR spektroskopie

Metoda je založena na odrazu paprsku na rozhraní mezi dvěma fázemi: krystalovou fází ATR s relativně vysokým indexem lomu a fází vzorku s nižším indexem lomu. Pokud paprsek záření dopadá na rovinu vzorku pod úhlem dopadu větším, než je kritický, pak je pozorován téměř úplný odraz paprsku od povrchu vzorku. Ve skutečnosti záření proniká do malé hloubky do fáze vzorku, kde je částečně absorbováno. Při následných dopadech stejného paprsku světla na vzorek se tento jev opakuje a v důsledku toho se získá jakési absorpční spektrum. Pozorované frekvence absorbovaného záření se budou shodovat s frekvencemi získanými v infračervené přenosové spektroskopii [31] .

Pro provádění ATR spektroskopie jsou infračervené spektrometry vybaveny speciálním nástavcem. V něm je analyzovaná látka umístěna do přímého kontaktu s krystalem a fixována upínacím zařízením. Dále je krystalem přiváděno infračervené záření pod speciálně zvoleným úhlem, jehož intenzita je fixována na výstupu z krystalu. Obvykle se v disperzních přístrojích vyskytuje asi 25 odrazů a ve spektrometrech s Fourierovou transformací asi šest [31] .

ATR spektroskopie umožňuje analyzovat jak běžné kapalné vzorky, tak "složité" vzorky, jako jsou vodné roztoky, pasty a gely. Protože ATR krystal lze z kyvety snadno vyjmout, není aplikace a odstranění vzorku nijak zvlášť obtížné. Analyzovatelné jsou také prášky a polymery, které jsou na krystal přitlačovány speciálním zařízením. Pro analýzu kůže existují speciální kyvety, které se používají při studiu vlivu kosmetiky a léků na lidskou pokožku [31] .

Externí reflexní spektroskopie

Zaznamenaným parametrem v infračervené externí reflexní spektroskopii je intenzita odraženého světla. Pokud tuto hodnotu vydělíte intenzitou dopadajícího záření, dostanete hodnotu zvanou koeficient odrazu . Graf koeficientu odrazu v závislosti na vlnové délce (nebo frekvenci záření) obsahuje stejnou informaci jako klasická IR přenosová spektra [32] .

Spekulární reflexní spektroskopie se aplikuje na materiály nanesené na reflexní kovové povrchy nebo povrchy jiného materiálu, který odráží infračervené záření. Podstata metody spočívá v tom, že paprsek záření z IR spektrometru je přiváděn na studovaný povrch, kde proniká povlakem, odráží se od substrátu, opět prochází povlakem a dopadá na detektor zařízení. . Dvojitý průchod potahovým materiálem vede k částečné absorpci IR záření, což dává absorpční spektrum pro tento materiál. V tomto případě, na rozdíl od metody ATR, může mít vzorek drsný povrch a není v kontaktu s krystalem. Lze analyzovat povlaky o tloušťce 1 až 100 µm [33] .

Grazing reflexní spektroskopie se používá ke studiu velmi tenkých vrstev na odrazném povrchu. Při aplikaci záření pod velmi velkým úhlem dopadu se optická dráha skrz vrstvu materiálu značně zvětší, což umožňuje získat absorpční spektra takových materiálů. Pokud voda funguje jako reflektor, pak lze touto metodou studovat monomolekulární vrstvy olejů, tuků, lipidů atd. na jejím povrchu a zároveň získat informace o struktuře filmů. Podobně jsou in vivo studovány biologické membrány [34] .

K difuznímu odrazu dochází na hrubém povrchu a není zaostřen v určitém bodě, proto se pro práci s ním používají elipsoidní zrcadla, z nichž jedno zaměřuje IR záření na vzorek a druhé „sbírá“ odražené světlo a posílá jej do detektor. Difuzní reflexní spektroskopie našla uplatnění při analýze prášků, ale i vláknitých materiálů (papír, tkaniny) [35] .

Nevýhodou metod využívajících vnější odraz je složitost získaných spekter. Běžná transmisní spektra nesou informaci pouze o extinkčním koeficientu na konkrétní vlnové délce, zatímco v reflexní spektroskopii závisí intenzita odraženého světla také na indexu lomu. Kromě toho je třeba vzít v úvahu absorpční koeficient odrazné plochy. Kramers-Kronigovy transformace se používají k převodu experimentálních spekter na klasická transmisní spektra [36] .

IR emisní spektroskopie

Navzdory tomu, že většina infračervených spektrometrů je určena pro experimenty s absorpcí infračerveného záření, byly vyvinuty i metody pro infračervenou emisní spektroskopii, při které se zaznamenají infračervené vlny emitované látkou. IR emisní spektroskopie je citlivější než absorpční spektroskopie, protože má nulový šum. To znamená, že detektor vnímá pouze vlnové délky přicházející ze zkoumaného vzorku, zatímco při absorpční spektroskopii zdroj světla vyzařuje vlny v kontinuálním rozsahu vlnových délek [37] .

Tyto experimenty vyžadují speciální podmínky. Studovaný vzorek musí mít teplotu odlišnou od teploty spektrometru, jinak nebude mezi vzorkem a detektorem docházet k radiačnímu toku. Je žádoucí, aby teplota vzorku byla vyšší, protože intenzita IR záření ze vzorku silně roste s rostoucí teplotou. Je třeba také vzít v úvahu, že samotný spektrometr nebo topné těleso mohou být zdroji rušivého infračerveného záření pozadí [37] . Oběma problémům se lze vyhnout např. detektorem InSb chlazeným na teplotu kapalného dusíku (77 K ), a dalšími detektory chlazenými kapalným dusíkem nebo kapalným heliem (4 K), jejichž záření lze zanedbat [38] .

Typickou oblastí použití IR emisní spektroskopie je výzkum atmosféry: IR záření Země procházející atmosférickou vrstvou je detekováno satelitem ve směru nadir . Zemské záření má zároveň spektrum černého tělesa , ve kterém jsou absorpční pásy atmosférických molekul. Existují také metody pro záznam IR emisních spekter kapalin (například tenkých filmů roztavených solí), povrchů a pevných látek o malé tloušťce (několik mikronů). Důležitou oblastí použití emisní spektroskopie je infračervená astronomie . Zatímco většina nebeských těles vykazuje IR absorpční spektra na pozadí hvězd nebo prachu, některé objekty, jako jsou komety, mají pozoruhodná emisní spektra. Spektra ukazují horké odpařené molekuly a produkty jejich fotolýzy . Mezi částicemi detekovanými touto metodou jsou tedy H20 , CO , CO2 , C2 , CN, CH4 , C2H2 , C2H , CH30H , HCN , OCS a CH . Některé obří planety mají také emisní spektra . Stratosféra Jupiteru ukazuje přítomnost etanu a bylo zjištěno, že polární záře Jupitera, Saturnu a Uranu vyzařují záření H částic+
3. Většina těchto spekter byla zaznamenána kryogenními spektrometry a některá z nich byla pořízena Infrared Space Laboratory [39] .

Kombinace s jinými metodami

S plynovou chromatografií

Infračervená spektroskopie se pro svůj informační obsah používá v kombinaci s plynovou chromatografií . V tomto případě se jak separace směsi látek, tak záznam IR spektra provádí v plynné fázi. Látky opouštějící chromatografickou kolonu jsou přiváděny do tzv. "light tube" - vyhřívaného pozlaceného kanálu, který neumožňuje kondenzaci analyzovaných látek. Podél stejné trubice prochází infračervené záření, jehož intenzita je detekována na výstupu. Díky rychlé registraci IR spekter pomocí Fourierovy transformace je možné zaznamenat spektra pro každou složku separované směsi [40] .

Je třeba vzít v úvahu, že spektra látek v plynné fázi se obvykle liší od spekter kondenzovaných látek. Technika zmrazení se používá k získání IR spekter sloučenin, pevných nebo kapalných při pokojové teplotě. Látky opouštějící kolonu padají na desku chlazenou kapalným dusíkem, načež je spektrum zaznamenáváno přímo z desky [40] .

Zvláště zajímavá je kombinace plynové chromatografie, infračervené spektroskopie a hmotnostní spektrometrie . Protože se látka během IR analýzy nezničí, lze ji analyzovat také na hmotnostním spektrometru. Taková analýza poskytuje velmi velké množství analytických informací nezbytných pro identifikaci chemických sloučenin [40] .

S termogravimetrickou analýzou

Termogravimetrická analýza je neocenitelným nástrojem pro charakterizaci a studium polymerních materiálů. Během této analýzy se malé množství polymeru zahřeje v inertní atmosféře a jeho hmotnost se sleduje z hlediska poklesu jeho hmotnosti v závislosti na teplotě a době experimentu. V tomto případě obvykle dochází k těkání různých změkčovadel a dalších přísad . Pokud jsou těkavé složky neznámé, lze jejich strukturu určit pomocí IR spektroskopie v reálném čase. K tomu jsou plynné látky přenášeny inertním plynem do speciální komory, kterou prochází infračervené záření [41] .

Někdy se při zahřívání polymerů neuvolňují jednotlivé látky, ale jejich směsi. Přes určitý informační obsah IR spekter směsí látek se používají i metody pro jejich samostatnou analýzu. K tomu jsou těkavé složky adsorbovány na aktivním uhlí , poté desorbovány a analyzovány na plynovém chromatografu s detekcí IR spektrometrem [41] .

Dvourozměrná IR spektroskopie

Dvourozměrná infračervená spektroskopie je relativně nová metoda, která umožňuje rozšířit možnosti standardní IR spektroskopie. Dvourozměrné IR spektrum je získáno korelační analýzou dynamických fluktuací signálu , které jsou způsobeny vnějšími poruchami různé povahy. Taková spektra nacházejí své hlavní uplatnění při studiu interakcí mezi funkčními skupinami. Záznam dvourozměrného spektra umožňuje zjednodušit jednorozměrná spektra přetížená signály, zlepšit rozlišení díky výskytu druhého rozměru a detekovat korelace mezi částmi molekuly [42] .

Dvourozměrná IR spektroskopie nemůže být založena na pozorování běžných vibračních přechodů v molekulách, protože k nim dochází velmi rychle (v řádu pikosekund), ve srovnání například s NMR spektroskopií , kde je relaxační doba mikrosekundy, což možné zaznamenat dvourozměrná NMR spektra založená na stejných přechodech jako jednorozměrná. Při dvourozměrné infračervené spektroskopii je třeba pozorovat další relaxační procesy, které jsou vyvolány vnějším působením. Výsledkem je tzv. dynamické IR spektrum, ve kterém se intenzity pásem, jejich poloha (vlnová čísla) a směr absorpcí ( fenomén dichroismu ) mění s časem. Vnější vlivy mohou být elektrické, tepelné, magnetické, chemické, akustické nebo mechanické faktory, z nichž každý má svůj vlastní jedinečný vliv na systém. Díky tomu je možné získat dvourozměrná spektra obsahující různé soubory informací [43] .

Aplikace

Spolu se svým tradičním použitím v různých oblastech chemie pro stanovení struktury a identifikaci chemických sloučenin našla infračervená spektroskopie uplatnění také v dalších speciálních oblastech.

Studium uměleckých památek

Spolu s Ramanovou spektroskopií nachází IR spektroskopie uplatnění při analýze složení různých uměleckých předmětů. Nezbytnou součástí takových aplikací je analýza anorganických a organických pigmentů a barviv . Protože infračervená spektroskopie umožňuje identifikovat chemické složení a strukturu pigmentu, je možné vyvodit řadu nepřímých závěrů, například o pravosti nebo době restaurování malby. Pokud je tedy bílým pigmentem na plátně období renesance podle analýzy oxid titaničitý ve formě rutilu nebo anatasu , používaný ve výtvarném umění od roku 1923, respektive 1947, pak je obraz buď padělaný, nebo má nedávno obnovena [44] .

Materiály jako len a bavlna nelze analyzovat infračerveným zářením kvůli silné absorpci molekul vody [45] . Totéž platí pro anorganické pigmenty: mají nízké vlnové číslo a obsahují hydroxylové skupiny v hydratovaných krystalech. Proto má IR spektroskopie širší uplatnění při identifikaci organických pigmentů, pojiv a směsí [46] . Role IR spektroskopie je zvláště důležitá při studiu objektů s fluorescenčním povlakem nebo fluorescenčními nečistotami, protože v takových případech fluorescence interferuje s projevy signálů Ramanovy spektroskopie [45] .

Studium uměleckých objektů pomocí IR záření se začalo provádět dříve než Ramanovy spektroskopické studie a již byly shromážděny poměrně rozsáhlé databáze IR spekter pro pigmenty, ale i syntetické a přírodní materiály. Podobné analýzy také usnadnilo vytvoření přenosných zařízení, která umožňují analyzovat předměty na jejich místě, například v muzeích [45] .

Lékařské aplikace

Možnost získat informace o přítomnosti určitých funkčních skupin ve vzorku umožnila využít infračervenou spektroskopii pro lékařské účely jako nástroj pro studium biochemie tkání . Zejména IR spektroskopie je citlivá na strukturu a koncentraci makromolekul ( proteiny , DNA ) a je mnohem méně použitelná pro detekci malých molekul, které se nacházejí v buňkách v nízké koncentraci. Změny v IR spektrech biologických materiálů ukazují na patologie spojené s porušením biochemického složení vzorku. Například rakovinné změny jsou často spojeny s přítomností více jader v buňce. Infračervená spektroskopie tedy ukazuje diagnostické změny spojené se zvýšeným vychytáváním nukleových kyselin [47] .

Biologické tekutiny se studují v objemu 5-10 μl průchodem okénkem CaF 2 nebo BaF 2 . V případě potřeby se spektrum vody matematicky odečte od získaných spekter. Vodu lze také předběžně odstranit vysušením vzorku a prostudováním zbytku ve formě tenkého filmu, avšak v tomto případě se ztratí informace o těkavých složkách vzorku a jeho hydrataci. Podobným způsobem se získávají také tkáňová spektra řezáním a zkoumáním vzorků o objemu asi 1 mm3. Některé tkáně, které nelze stlačit mezi brýlemi (kůže, svaly), jsou podrobeny ATR vyšetření [47] .

Sběr a interpretace dat je možná buď klasickou metodou (studium intenzity charakteristických absorpčních pásem ze spekter) nebo konstrukcí prostorových map frekvenční intenzity. V druhém případě je použit infračervený mikroskop, který umožňuje snímat spektra postupně z daných bodů vzorku a následně zobrazit výsledek ve formě trojrozměrného grafu [47] .

Výhodou této výzkumné metody je univerzálnost přístroje: pro studium široké škály poruch v různých tkáních není potřeba žádná velká rekonfigurace ani použití speciálních detektorů a činidel [47] .

Aplikace ve forenzní

Hlavními úkoly IR spektroskopie ve forenzní technice jsou identifikace původu a značky automobilových laků, analýza vláken z místa činu, zkoumání a porovnávání typu inkoustu nebo tonerů na dokumentech, rozlišování přírodních a umělých drahokamů a analýzy potravin a fyziologických vzorků [48] .

Vzhledem k povaze analyzovaných materiálů používají odborníci řadu neobvyklých modifikací infračervené spektroskopie. Často se například používá diamantová kovadlinová buňka , která umožňuje zploštění i velmi malého vzorku (řádově 5 µm) pod vysokým tlakem na přijatelnou plochu, která umožňuje zaznamenat infračervené přenosové spektrum. Pokud se vzorkem nelze pohybovat, nebo pokud má reflexní povrch, zaznamená se IR spektrum v odrazu mikroskopem nebo konvenční celou. Někdy se používá záznam spektra z difúzního odrazu [49] .

Viz také

Poznámky

Komentáře
  1. ↑ Normální vibrace jsou takové, které nezávisí na jiných vibracích.
  2. ↑ Tento výraz je získán ze skutečnosti, že každý z n atomů molekuly má v trojrozměrném prostoru 3 stupně volnosti, což znamená, že molekula má celkem 3 n stupňů volnosti. Z toho tři jsou translační stupně volnosti spojené s pohybem celé molekuly v prostoru, dva nebo tři další jsou rotační stupně volnosti (u lineární molekuly jeden ze stupňů volnosti degeneruje, protože nevede k změna energie). V souladu s tím jsou zbývající stupně volnosti oscilační.
  3. ↑ Režim akumulace znamená vícenásobný záznam spektra stejného vzorku a jejich následné matematické sečtení, v důsledku čehož se intenzita náhodného šumu ve srovnání s jedním spektrem snižuje a intenzita signálu se zvyšuje.
  4. ↑ Ve skutečnosti je rozdíl v délkách vazeb izotopových analogů pouze zdánlivý. Faktem je, že délka rovnovážné vazby se vypočítá jako průměrná délka mezi krajními polohami atomů v procesu vibrace. Deuterium osciluje s menší amplitudou než protium, takže průměrná délka vazby se zdá kratší. Pokud se výpočet provádí pro nevibrační molekulu, tento rozdíl zmizí.
Prameny
  1. ↑ 1 2 3 Smith, 1982 , str. 9-11.
  2. ↑ 12 ESS , 2010 , str. 2938.
  3. ↑ Larkin, 2011 , str. čtyři.
  4. ↑ ESS, 2010 , str. 2941.
  5. ↑ ESS, 2010 , str. 2943-2944.
  6. ↑ 12 ESS , 2010 , str. 2944.
  7. ↑ 1 2 3 Larkin, 2011 , str. 7-8.
  8. ↑ Larkin, 2011 , str. 8-9.
  9. ↑ Smith, 1982 , str. 145.
  10. ↑ 1 2 Stuart, 2004 , str. 8-13.
  11. ↑ 1 2 3 4 5 6 Larkin, 2011 , str. 10-13.
  12. ↑ Smith, 1982 , str. 151-152.
  13. ↑ Smith, 1982 , str. 153.
  14. ↑ 1 2 Smith, 1982 , str. 153-154.
  15. ↑ 12 Larkin , 2011 , str. 13-15.
  16. ↑ Böcker, 2009 , s. 141.
  17. ↑ 1 2 Böcker, 2009 , s. 156-157.
  18. ↑ 1 2 Böcker, 2009 , s. 157-160.
  19. ↑ Stuart, 2004 , str. 18-19.
  20. ↑ Böcker, 2009 , s. 159.
  21. ↑ 1 2 3 4 5 6 ESS, 2010 , str. 1187-1190.
  22. ↑ Smith, 1982 , str. 156-157.
  23. ↑ 1 2 3 ESS, 2010 , str. 1174-1176.
  24. ↑ 1 2 3 ESS, 2010 , str. 2213-2220.
  25. ↑ 1 2 3 4 ESS, 2010 , str. 1210-1217.
  26. ↑ 1 2 3 Böcker, 2009 , s. 164.
  27. ↑ Böcker, 2009 , s. 165-166.
  28. ↑ Böcker, 2009 , s. 166-167.
  29. ↑ Böcker, 2009 , s. 167-169.
  30. ↑ 1 2 Böcker, 2009 , s. 169-171.
  31. ↑ 1 2 3 Böcker, 2009 , s. 171-175.
  32. ↑ Böcker, 2009 , s. 176.
  33. ↑ Böcker, 2009 , s. 176-177.
  34. ↑ Böcker, 2009 , s. 177-178.
  35. ↑ Böcker, 2009 , s. 179-180.
  36. ↑ Böcker, 2009 , s. 180-181.
  37. ↑ 12. Bernath , 1996 .
  38. ↑ Bernath2, 2000 , str. 183-184.
  39. ↑ Bernath2, 2000 , str. 209-215.
  40. ↑ 1 2 3 Böcker, 2009 , s. 189-190.
  41. ↑ 1 2 Böcker, 2009 , s. 190-191.
  42. ↑ Noda, 1990 , str. 550.
  43. ↑ Noda, 1990 , str. 550-551.
  44. ↑ ESS, 2010 , str. 27.
  45. ↑ 1 2 3 ESS, 2010 , str. 23.
  46. ↑ ESS, 2010 , str. 36.
  47. ↑ 1 2 3 4 ESS, 2010 , str. 1494-1497.
  48. ↑ ESS, 2010 , str. 681-692.
  49. ↑ ESS, 2010 , str. 681-682.

Literatura

Odkazy

Databáze IR spekter

Studijní materiály