Laktoferin

Laktoferin  je polyfunkční protein z rodiny transferinů . Laktoferin je globulární glykoprotein s molekulovou hmotností asi 80 kDa a je široce přítomen v různých sekrečních tekutinách, jako je mléko , sliny , slzy a nosní sekrety.

Laktoferin je jednou ze složek imunitního systému organismu , účastní se systému nespecifické humorální imunity , reguluje funkce imunokompetentních buněk a je proteinem akutní fáze zánětu .

Protein interaguje s DNA a RNA , polysacharidy , heparinem a laktoferin vykazuje některé své biologické funkce ve formě komplexů s těmito ligandy .

Struktura a fyzikální a chemické vlastnosti

Struktura molekuly laktoferinu

Laktoferin patří do rodiny transferinových proteinů, které transportují železo do buněk a kontrolují hladinu volného železa v krvi a ve zevních sekrecích. Laktoferin je přítomen v mléce lidí a jiných savců. [jeden]

Bylo prokázáno, že laktoferin se kromě mléka nachází v krevní plazmě , neutrofilech a je jedním z hlavních proteinů téměř ve všech exokrinních sekretech savců, jako jsou sliny , žluč , slzy a sekrety slinivky břišní [2] .

Koncentrace laktoferinu v mléce se pohybuje od 7 mg/ml v kolostru do 1 mg/ml ve zralém mléce.

Podle rentgenové difrakční analýzy je protein tvořen jedním polypeptidovým řetězcem, který obsahuje 692 aminokyselinových zbytků a tvoří dvě homologní globulární domény , nazývané N- a C-laloky (N-lalok, zbytky 1-333; C-lalok , zbytky 345-692), konce, které jsou spojeny krátkou a-šroubovicí [3] [4] .

Každý lalok se skládá ze dvou domén N1, N2 a C1, C2 a obsahuje jedno vazebné místo pro železo a jedno glykosylační místo . Stupeň glykosylace proteinu může být různý, proto se molekulová hmotnost proteinu podle různých zdrojů pohybuje od 76 do 80 kDa. Bylo prokázáno, že odolnost laktoferinu vůči degradaci proteázami nebo při nízkých hodnotách pH je způsobena vysokým stupněm glykosylace proteinů [5] .

Laktoferin je klasifikován jako alkalický protein s izoelektrickým bodem 8,7. Protein existuje ve dvou formách, železem nasycené (holo-LF) a železem nenasycené (apo-LF), jejich terciární struktury jsou různé: apo-LF se vyznačuje „otevřenou“ konformací N-laloku a „ uzavřená“ konformace C-laloku, zatímco studená LF je charakterizována uzavřenou konformací obou laloků [6] .

Každá molekula proteinu může reverzibilně vázat dva železité ionty nebo ionty zinku , mědi a dalších kovů [7] .

Vazebná centra jsou lokalizována v každé ze dvou proteinových globulí, které tvoří molekulu laktoferinu. V každém laloku je atom železa koordinován se šesti ligandy, z nichž čtyři jsou poskytovány polypeptidovým řetězcem (dva tyrosinové zbytky , jeden histidinový zbytek a jeden zbytek kyseliny asparagové ) a zbývající dvě vazby železa se tvoří s uhličitanovým nebo hydrogenuhličitanovým iontem. .

Laktoferin tvoří se železem načervenalý komplex, jeho afinita k železu je 300x vyšší než u transferinu [8] .

Navíc bylo prokázáno, že v mírně kyselém prostředí se zvyšuje afinita proteinu k železu, což usnadňuje přechod kovu z transferinu na laktoferin při zánětu , kdy se pH tkání snižuje vlivem mléčné a jiných kyselin. [9] .

Stupeň nasycení laktoferinu železem v lidském mléce je různými autory odhadován od 10 do 30 %. Bylo prokázáno, že protein se podílí nejen na transportu iontů železa, zinku a mědi, ale také na regulaci jejich vstřebávání [10] .

Přítomnost volně vázaných iontů zinku a mědi neovlivňuje funkci laktoferinu vázat železo a ve skutečnosti ji dokonce zvyšuje.

Polymerní formy

V plazmě i v sekrečních tekutinách může laktoferin existovat v různých polymerních formách od monomeru po tetramer . Bylo prokázáno, že protein vykazuje výraznou tendenci polymerovat in vitro a in vivo a ve vysokých koncentracích převládají polymerní formy laktoferinu. [9]

Řada autorů navíc zjistila, že dominantní formou laktoferinu za fyziologických podmínek je tetramer; poměr monomer : tetramer při koncentraci proteinu 10 −5 M je 1 : 4. [11] [12] [13]

Existuje předpoklad, že oligomerní stav laktoferinu je určen koncentrací tohoto proteinu v médiu, navíc polymerace laktoferinu striktně závisí na přítomnosti Ca 2+ iontů . V přítomnosti vápenatých iontů a při koncentraci proteinu nižší než 10–10–10–11 M , byla pozorována převaha monomerní formy proteinu. Při koncentracích laktoferinu vyšších než 10 −9 -10 −10 M došlo k přechodu na tetramerní formu [14] [11] .

Titr laktoferinu v krvi odpovídá hodnotě této „přechodné koncentrace“, a proto by měl být laktoferin v krvi prezentován jako monomer i jako tetramer.

Bylo také prokázáno, že řada funkčních vlastností laktoferinu je dána oligomerním stavem molekuly proteinu. Laktoferin ve formě monomeru je tedy schopen silné vazby na DNA a regulaci procesů granulopoézy , zatímco tetramerní forma neváže DNA. Existují všechny důvody domnívat se, že na organizaci oligomerního stavu proteinu se podílejí slabé interakce, převážně hydrofobní a elektrostatické kontakty postranních skupin aminokyselinových zbytků molekuly laktoferinu a případně glykosidických zbytků proteinu.

Biologické funkce

Laktoferin patří k přirozenému imunitnímu systému , existují důkazy, že laktoferin se nepřímo podílí na procesech buněčné imunity. Hlavními biologickými funkcemi proteinu je vazba a transport iontů železa, ale kromě toho má laktoferin antibakteriální, antivirové, antiparazitární, různé katalytické účinky a také protirakovinné, antialergické, imunomodulační a radioprotektivní vlastnosti. .

Antibakteriální aktivita

Nejvíce prozkoumaný je mechanismus antibakteriální aktivity laktoferinu. Antibakteriální vlastnosti proteinu jsou dány schopností laktoferinu vázat železo a zbavovat tak bakteriální mikroflóru mikroelementu nezbytného pro její růst a životní aktivitu [15] . Baktericidní vlastnosti proteinu jsou dány také přítomností specifických laktoferinových receptorů na buněčném povrchu mikroorganismů. Bylo prokázáno, že laktoferin váže lipopolysacharidy (LPS) bakteriálních stěn a oxidovaná forma železa, která je součástí proteinu, iniciuje jejich peroxidaci . To vede ke změně permeability membrány a následné lýze buněk [ 15] .

Všechny výše uvedené mechanismy antibakteriálního působení laktoferinu přímo závisí na vlastnostech proteinu vázat železo. Protiinfekční aktivita laktoferinu však může být založena na jiných mechanismech, které nezávisí na schopnosti proteinu vázat železité ionty, např. stimulační účinek laktoferinu na fagocytózu a vliv na aktivitu komplementu [16] .

Nejvíce prozkoumaným mechanismem antibakteriálního působení proteinu, nezávisle na jeho schopnosti vázat železo, je však specifická interakce laktoferinu s vnější bakteriální membránou, která vede ke smrti bakteriálních buněk [17] .

Bylo prokázáno, že protein narušuje bakteriální membránu a dokonce se dostává do buňky. Laktoferricin je zodpovědný za specifickou vazbu na bakteriální stěnu .

Antivirová aktivita

Bylo prokázáno, že laktoferin má antivirovou aktivitu proti širokému spektru lidských a zvířecích virů s genomy DNA a RNA [20] .

Laktoferin váže různé virové antigeny převážně in vitro . V současné době působí protein proti virům herpes simplex 1 a 2 , [21] [22] cytomegalovirus , [23] HIV , [22] [24] virus hepatitidy C , [25] < [26] hantaviry , rotaviry , polioviry prvního typu, [19] adenoviry , [27] respirační syncyciální virus , virus myší Friendovy leukémie [19] , COVID-19. [28]

Nejvíce prozkoumaným mechanismem antivirové aktivity laktoferinu je zabránění vstupu virových částic do cílových buněk. Mnoho virů má tendenci vázat heparinsulfátové glykosaminoglykany a lipoproteiny membrán eukaryotických buněk. Po počátečním kontaktu s buňkou virová částice interaguje se specifickými virovými receptory a vstupuje do buňky. [26]

Laktoferin váže heparansulfát-glykosaminoglykany a lipoproteiny na buněčný povrch, čímž zabraňuje navázání virových částic na ně a dalšímu pronikání viru do buňky. Je zajímavé, že laktoferricin, který poskytuje hlavní antimikrobiální vlastnosti laktoferinu, prakticky nevykazuje antivirovou aktivitu, navíc apo-LF ve většině případů vykazuje mnohem větší antivirový účinek než laktoferin nasycený kovy. [dvacet]

Kromě interakce s buněčnými receptory laktoferin přímo váže virové částice a zabraňuje jejich pronikání do buněk. Potvrzuje to antivirový účinek proteinu proti rotavirům, [19] jejichž buněčnými receptory jsou sacharidové zbytky, které se složením liší od glykosaminoglykanů, byla prokázána interakce laktoferinu s obalovými proteiny viru hepatitidy . [26] Posledním momentem ve vývoji antivirové aktivity proteinu je inhibice replikace viru po vstupu viru do buňky. [19] [24] Tento nepřímý antivirový účinek je způsoben regulací syntézy přirozených zabíječů , granulocytů a makrofágů - buněk, které hrají rozhodující roli v raných fázích rozvoje virové infekce. PCR v reálném čase a mikročipy DNA prokázaly zvýšení exprese genu laktoferinu u závažného akutního respiračního syndromu (SARS). [29]

Antifungální aktivita

Bylo prokázáno, že laktoferin a laktoferricin inhibují in vitro růst Trichophyton mentagrophytes , který způsobuje řadu kožních onemocnění, jako je kožní onemocnění . [30] Laktoferin působí proti Candida albicans , symbiontům, kteří tvoří kolonie v ústní sliznici zdravých lidí. [31] [32] Tento druh je však hlavním plísňovým patogenem u lidí s oportunními infekcemi dutiny ústní a těla jako celku, stejně jako u pacientů s oslabenou imunitou . Flukonazol byl dlouhou dobu používán jako hlavní antimykotikum proti Candida albicans , což vedlo ke vzniku kmenů odolných vůči účinkům tohoto léku. Bylo prokázáno, že laktoferin v komplexu s flukonazolem má antifungální aktivitu proti flukonazol-rezistentním kmenům Candida albicans , jakož i dalším druhům Candida : C. glabrata , C. krusei , C. parapsilosis a C. tropicalis . [31] Antifungální aktivita je pozorována pouze v případě sekvenční inkubace buněk Candida s laktoferinem a poté s flukonazolem, ale ne naopak. Laktoferricin má antifungální aktivitu, která převyšuje aktivitu samotného laktoferinu, v laktoferricinu byly studovány dva peptidy obsahující 1-11 a 17-26 aminokyselinových zbytků laktoferinu. Synteticky syntetizovaný peptid 1-11 má mnohem větší aktivitu proti Candida albicans než nativní LF. [31] Kromě toho se ukázalo, že peptid obsahující 4-11 aminokyselinových zbytků nezpůsobuje smrt buněk Candida , což ukazuje na důležitost 1-4 aminokyselin proteinu v projevu antifungální aktivity. [33] Studie syntetického peptidu 17-26 ukázaly, že stimuluje tvorbu hydroxylových radikálů myšími neutrofily a v kombinaci s antimykotikem amfotericinem B chrání zvířata před smrtelnými infekcemi Candida albicans a Aspergillus fumigatus v mnohem větší míře než samotného amfotericinu B a in vitro byla antifungální aktivita peptidu 10krát nižší než u amfotericinu B. [34]

Orální podání laktoferinu pitnou vodou imunokompromitovaným myším s příznaky stomatitidy vedlo k významnému snížení počtu Candida albicans v dutině ústní a velikosti poškození jazyka. [35] U několika infikovaných zvířecích modelů bylo prokázáno, že perorální podávání laktoferinu snižuje počet patogenních organismů v tkáních v blízkosti gastrointestinálního traktu . Navíc HIV-infikovaní pacienti s Candida albicans rezistentní na antimykotikum zcela vyléčili plísňovou infekci po podání směsi obsahující laktoferin, lysozym a introakonazol . [36]

Na rozdíl od antivirových a antibakteriálních účinků laktoferinu je o antifungálním mechanismu působení proteinu známo jen velmi málo. Bylo prokázáno, že antifungální aktivita laktoferinu je zajištěna destrukcí buněčné stěny a vazbou proteinu na plazmatickou membránu C. albicans . Působení laktoferinu na C. albicans in vitro vede ke změně membránového potenciálu a acidifikaci cytoplazmy buněk Candida , což ukazuje na přímou nebo nepřímou interakci laktoferinu s plazmatickou membránou. [32]

Protože laktoferin umožňuje minimalizovat koncentrace léčiva, při kterých jsou plísňové infekce účinně léčeny, lze jej použít ve spojení s antimykotiky při léčbě onemocnění způsobených kmeny rezistentními vůči léčivům. Velmi účinné může být synergické působení laktoferinu s antibiotiky , antimykotiky a antibakteriálními léky proti patogenům. Kromě toho může použití laktoferinu, který je jedním z nespecifických obranných faktorů ve slinách, omezit šíření druhů Candida rezistentních na flukonazol mezi lidmi s oslabeným imunitním systémem, zejména mezi pacienty s AIDS. [37]

Interakce s nukleovými kyselinami

Interakce proteinů s DNA je předmětem mnoha studií zaměřených na zvážení mechanismů, které řídí genovou expresi . [11] [38] Jednou z důležitých vlastností laktoferinu je jeho schopnost vázat nukleové kyseliny. Bylo zjištěno, že proteinová frakce izolovaná z mléka obsahuje 3,3 % RNA, [11] navíc při interakci s jednovláknovou a dvouvláknovou DNA protein přednostně váže dvouvláknovou DNA. Interakce laktoferinu s DNA byla částečně inhibována přidáním protilátek k DNA získané z krevní plazmy pacientů se systémovým lupus erythematodes .

Schopnost laktoferinu vázat DNA se aktivně využívá k izolaci a čištění proteinů pomocí afinitní chromatografie na kolonách s imobilizovanými sorbenty obsahujícími DNA . Byla navržena metoda izolace laktoferinu z mléčné plazmy na agaróze s imobilizovanou jednovláknovou DNA. [39] Při izolaci proteinu z moči novorozenců na tomto sorbentu bylo zjištěno, že při průchodu gastrointestinálním traktem se kromě intaktního laktoferinu (78 kDa) tvoří dva fragmenty o velikosti 51 a 39 kDa, které se také vážou DNA. [čtrnáct]

Enzymatické aktivity laktoferinu

Laktoferin hydrolyzuje RNA a vykazuje vlastnosti sekrečních ribonukleáz specifických pro pyrimidin .

Srovnávací analýza dat rentgenové difrakce laktoferinu a komplexu RNázy A s 2'-5' CpG substrátovým analogem spolu s analýzou homologie primární sekvence těchto dvou proteinů prokázala přítomnost strukturních motivů v molekule lakoferinu podobné aktivnímu centru proteinů nadrodiny RNázy A. Pomocí metody molekulárního modelování byla provedena analýza topografie potenciálního aktivního místa laktoferinu analogicky jako u RNázy A. [ 40] orientační katalýza na další blízké zbytky na možném aktivním místě. Substrátové vazebné místo je tvořeno Asp-244, Lys-241 a Thr-90. Potenciální centrum RNázy laktoferinu se tedy nachází v interdoménové oblasti proteinu.

Schopnost laktoferinu hydrolyzovat RNA odhaluje další aspekt funkce proteinu v těle, protože bylo prokázáno, že mléčné RNázy ničením genomu RNA inhibují reverzní transkripci retrovirů způsobujících rakovinu prsu u myší. [41] U žen ve skupině Parsi v západní Indii bylo prokázáno, že mají výrazně nižší hladiny mléčných RNáz než jiné skupiny a mají třikrát vyšší výskyt rakoviny prsu . [42] Lze tedy předpokládat, že zejména mléčné RNázy a laktoferin hrají důležitou roli v patogenezi onemocnění způsobených různými retroviry .

Bylo také prokázáno, že izoformy laktoferinu mají nukleázové a fosfatázové aktivity. [43] Hydrolýza oligodeoxyribonukleotidů laktoferinem probíhala mnohem pomaleji než u substrátů DNA s vysokou molekulovou hmotností . Studovaná proteinová frakce neobsahovala ionty železa. Optimální hodnota pH reakční směsi během hydrolýzy DNA se odhaduje na blízko 7,0-7,5. Tato hodnota výrazně převyšuje pH optimum ostatních známých DNáz (5,0–5,5 pro DNázu II v lidské krvi). Navíc ve vlastnostech, jako je aktivace katalytické funkce nízkomolekulárními efektory a kovovými ionty, se laktoferin významně liší od ostatních enzymů s DNázovou aktivitou. [44]

Byla ukázána nukleotid-hydrolyzující aktivita laktoferinových přípravků. [43] Laktoferin, kromě aktivity ATPázy, má aktivitu, která odštěpuje fosfátovou skupinu z jakýchkoli ribo- a deoxyribonukleosid mono-, di- a trifosfátů. Laktoferin má vlastnosti nespecifické nukleosid-5'-mono-, di- a trifosfátfosfatázy, která se nazývala nukleotidfosfatáza. [43] Současně jsou rychlosti defosforylace nukleotidů nižší než u klasických ATPáz a nukleosidáz, ale srovnatelné nebo dokonce vyšší než u jiných rozšířených enzymů, jako jsou restrikční endonukleázy . [45] [46] Bylo prokázáno, že ATP-hydrolyzující aktivita je na železe nezávislá vlastnost proteinu a konformační přeuspořádání způsobené koordinací železných iontů neovlivňují ATPázové centrum molekuly. [43]

Ukázalo se, že přípravky laktoferinu od různých dárců nerozdělených na izoformy hydrolyzovaly pouze 4,6-ethyliden(G7)-p-nitrofenyl-(G1)-a,D-maltoheptaosid, ale ne jiné oligosacharidy s jinými vazbami mezi monosacharidovými zbytky ( celobióza laktóza , sacharóza ) . [43] Preparáty laktoferinu katalyzovaly hydrolýzu maltoheptaosidu s Km = (2,0±0,9) mM. Celkově je tato hodnota Km pro maltoheptaosid srovnatelná nebo dokonce vyšší než u α-amylázy (0,2–5 mM) a katalyticky aktivních protilátek v mléce a krvi pacientů s autoimunitními onemocněními (~ 10–4 M). [47] [48]

Geny laktoferinu

Bylo studováno 60 sekvencí genů laktoferinu z 11 druhů savců. [49]

U většiny druhů je stop kodonTAA , a TGAu Mus musculus . Kódující část je v důsledku delecí , inzercí a také stop kodonových mutací významně odlišná a její délka se pohybuje od 2,055 do 2,190 párů bází . Polymorfismus genů mezi druhy výrazně převyšuje vnitrodruhový polymorfismus laktoferinu. Byly zjištěny rozdíly v aminokyselinové sekvenci: 8 pro Homo sapiens , 6 pro Mus musculus , 6 pro Capra hircus , 10 pro Bos taurus a 20 pro Sus scrofa . Takový rozptyl může naznačovat funkční rozdíly mezi laktoferiny různých druhů. [49]

U lidí je gen laktoferinu LTF umístěn na třetím chromozomu v lokusu 3q21-q23 .

U býka se kódující sekvence skládá ze 17 exonů a je dlouhá asi 34,5 kb . Exony genu bovinního laktoferinu jsou podobné velikosti jako exony jiných genů v rodině transferinů , zatímco velikosti intronů v rámci rodiny se liší. Evoluční podobnost velikostí exonů a jejich distribuce v doménách molekuly proteinu ukazuje, že gen laktoferinu vznikl duplikací . Sekvence promotorové oblasti genu bovinního laktoferinu postrádá některá vazebná místa zesilovače transkripce ve srovnání s odpovídajícími sekvencemi lidského a myšího genu laktoferinu , což vysvětluje relativně nízkou expresi genu laktoferinu u skotu. [padesáti]

Studium polymorfismu genů kódujících laktoferin může přispět k vyšlechtění plemen hospodářských zvířat odolných vůči mastitidě [51] a také k vytvoření léčiv na bázi proteinů. V roce 2007 vytvořil Ústav genové biologie Ruské akademie věd rekombinantní laktoferin neolaktoferin .

Laktoferinový receptor

Receptor laktoferinu hraje důležitou roli při internalizaci laktoferinu a usnadňuje vstřebávání iontů železa vázaných na laktoferin . Kvantitativní PCR prokázala zvýšení exprese laktoferinového receptoru s věkem v duodenu a snížení exprese v jejunu . [52]

Viz také

• transferiny
• Žehlička
• Mléko

Poznámky

1. ↑ Johansson, B. Izolace červeného proteinu obsahujícího železo z lidského mléka. (1960) Acta Chem. Scand., 14, 510-512.
2. ↑ Birgens, H. Laktoferin v plazmě měřený technikou ELISA: důkaz, že plazmatický laktoferin je indikátorem obratu neutrofilů a aktivity kostní dřeně u akutní leukémie (1985) Scand. J. Haematol., 34(4), 326-331.
3. ↑ Baker, HM, Anderson, BF, Kidd, RD, Shewry, SC a Baker, EN Trojrozměrná struktura laktoferinu: rámec pro interpretaci funkce. In Lactoferrin: Structure, Function and Application (Shimazaki, K., ed.). (2000) str. 3–15, Elsevier Science, Amsterdam.
4. ↑ Baker, EN, Baker, HM Molekulární struktura, vazebné vlastnosti a dynamika laktoferinu (2005) Cell. Mol. Life Sci., 62, 2531-2539.
5. ↑ Hakansson, A., Zhivotovsky, B., Orrenius, S., Sabharwal, H., Svanborg, C. Apoptosis induced by a human milk protein (1995) Proč. Natl. Akad. sci. USA, 92(17), 8064-8068.
6. ↑ Jameson, GB, Anderson, BF, Norris, GE, Thomas, DH, Baker, EN Struktura lidského apolactoferinu při rozlišení 2,0 A. Zpřesnění a analýza ligandem indukované konformační změny (1998) Acta Crystallogr. D Biol. Crystallogr., 54, 1319-1335.
7. ↑ Levay, PF, Viljoen, M. Lactoferrin: obecný přehled. (1995) Haematologica., 80(3), 252-267.
8. ↑ Mazurier J., SpikG. Srovnávací studie vazebných vlastností železa při přenosu člověka. Kompletní a sekvenční saturace železem a desaturace laktotransferinu. (1980) Biochim. Biophys. Acta, 629, 399-408.
9. ↑ 1 2 Sousa, M., Brock, JH, Železo v imunitě. Cancer and Inflammation (1989) John Wiley & Sons.
10. ↑ Shongwe, MS, Smith, CA, Ainscough, EC, Baker, HA, Brodie, AM, Baker, EN Vazba aniontů lidským laktoferinem: výsledky z krystalografických a fyzikálně chemických studií. (1992) Biochem. J., 31, 4451-4458.
11. ↑ 1 2 3 4 Bennett, RM, Davis, J. Laktoferin interaguje s deoxyribonukleovou kyselinou: preferenční reaktivita s dvouvláknovou DNA a disociace komplexů DNA-anti-DNA. (1982) J. Lab. Clin. Med., 99, 127-138.
12. ↑ Bagby, GCJr., Bennett, RM Zpětná vazba regulace granulopoézy: polymerace laktoferinu ruší jeho schopnost inhibovat produkci CSA (1982) Blood, 60(1), 108-112.
13. ↑ Mantel, C., Miyazawa, K., Broxmeyer, H.E. Fyzikální charakteristiky a polymerace během saturace laktoferinu železem, myelopoetické regulační molekuly se supresorovou aktivitou (1994) Adv. Exp. Med. Biol., 357, 121-132.
14. ↑ 1 2 Furmanski, P., Li, ZP, Fortuna, MB, Swamy, CV, Das, MR Mnohočetné molekulární formy lidského laktoferinu. Identifikace třídy laktoferinů, které mají ribonukleázovou aktivitu a postrádají schopnost vázat železo (1989) J. Exp. Med., 170, 415-429.
15. ↑ 1 2 Farnaud, S., Evans, RW Laktoferin – multifunkční protein s antimikrobiálními vlastnostmi. (2003) Mol. Immunol. 40(7), 395-405.
16. ↑ Xanthou, M. Immune protection of human milk (1998) Biol. Novorozenec, 74, 121-133.
17. ↑ Odell, EW, Sarra, R., Foxworthy, M., Chapple, DS, Evans, RW Antibakteriální aktivita peptidů homologních s oblastí smyčky v lidském laktoferinu. (1996) FEBS Lett., 382, ​​175-178.
18. ↑ Kuwata, H., Yip, TT, Yip, CL, Tomita, M., Hutchens, TW Baktericidní doména laktoferinu: detekce, kvantifikace a charakterizace laktoferricinu v séru pomocí afinitní hmotnostní spektrometrie SELDI. (1998) Biochem. Biophys. Res. Commun., 245, 764-773.
19. ↑ 1 2 3 4 5 Sojar, HT, Hamada, N., Genco, RJ Struktury podílející se na interakci Porphyromonas gingivalis fimbriae a lidského laktoferinu. (1998) FEBS Lett., 422, 205-208.
20. ↑ 1 2 van der Strate, BW, Beljaars, L., Molema, G., Harmsen, MC, Meijer, DK Antivirové aktivity laktoferinu. (2001) Antivirová. Res., 52(3), 225-239.
21. ↑ Fujihara, T., Hayashi, K. Laktoferin inhibuje infekci myší rohovky virem herpes simplex typu-1 (HSV-1). (1995) Arch.Virol., 140, 1469-1472.
22. ↑ 1 2 Giansanti, F., Rossi, P., Massucci, MT, Botti, D., Antonini, G., Valenti, P., Seganti, L. Antivirová aktivita ovotransferinu odhaluje evoluční strategii pro obranné aktivity laktoferinu . (2002) Biochem. Cell Biol., 80(1), 125-130.
23. ↑ Harmsen, MC, Swart, PJ, De Bethune, MP, Pawels, R., De Clercq, E. Antivirové účinky plazmatických a mléčných proteinů: laktoferin vykazuje silnou aktivitu jak proti viru lidské imunodeficience, tak proti replikaci lidského cytomegaloviru in vitro . (1995) J. Infect. Dis., 172, 280-288.
24. ↑ 1 2 Puddu, P., Borghi, P., Gessani, S., Valenti, P., Belardelli, F., Seganti, L. Antivirový účinek bovinního laktoferinu nasyceného kovovými ionty na rané kroky viru lidské imunodeficience typu 1 infekce. (1998) Int. J Biochem. Cell Biol., 30(9), 1055-1062.
25. ↑ HS Azzam1, C. Goertz2, M. Fritts2 a WB Jonas Přírodní produkty a virus chronické hepatitidy C (2007) Liver Int. únor;27(1):17-25. Posouzení. (2007) Erratum v: Liver Int. 27. dubna (3): 421.
26. ↑ 1 2 3 Nozaki, A., Ikeda, M., Naganuma, A., Nakamura, T., Inudoh, M., Tanaka, K., Kato, N. Identifikace peptidu odvozeného od laktoferinu s vazebnou aktivitou na hepatitidu Obalový protein E2 viru C. (2003) J. Biol. Chem., 278(12), 10162-10173.
27. ↑ Arnold, D., Di Biase, AM, Marchetti, M., Pietrantoni, A., Valenti, P., Seganti, L., Superti, F. Antiadenovirová aktivita mléčných proteinů: laktoferin zabraňuje virové infekci. (2002) Antiviral Res., 53(2), 153-158.
28. ↑ Mirabelli, C., Wotring, JW, Zhang, CJ, McCarty, SM, Fursmidt, R., Frum, T., ... & Sexton, JZ (2021). Morfologické buněčné profilování infekce SARS-CoV-2 identifikuje kandidáty na přepracování léků pro COVID-19. PNAS, 118(36) e2105815118 PMID 32577649 PMC 7302203 doi : 10.1073/pnas.2105815118
29. ↑ Renji Reghunathan, Manikandan Jayapal, Li-Yang Hsu, Hiok-Hee Chng, Dessmon Tai, Bernard P Leung a Alirio J Melendez. Profil exprese genů imunitní odpovědi u pacientů se závažným akutním respiračním syndromem  // BMC Immunol. - 2005. - č. 6 . - S. 2 .
30. ↑ Wakabayashi, H., Uchida, K., Yamauchi, K., Teraguchi, S., Hayasawa, H., Yamaguchi, H. Laktoferin podávaný v potravinách usnadňuje léčbu dermatofytózy u modelů morčat. (2000) J. Antimicrob. Chemother., 46(4), 595-602.
31. ↑ 1 2 3 Lupetti, A., Paulusma-Annema, A., Welling, MM, Dogterom-Ballering, H., Brouwer, CP, Senesi, S., Van Dissel, JT, Nibbering, PH Synergická aktivita N- terminální peptid lidského laktoferinu a flukonazolu proti druhům Candida. (2003) Antimicrob. Agents Chemother., 47(1), 262-267.
32. ↑ 1 2 Viejo-Diaz, M., Andres, MT, Fierro, JF Modulace in vitro fungicidní aktivity lidského laktoferinu proti Candida albicans koncentrací extracelulárních kationtů a metabolickou aktivitou cílových buněk. (2004) Antimicrob. Agents Chemother., 48(4), 1242-1248.
33. ↑ Van Berkel, PH, Geerts, ME, van Veen, HA, Mericskay, M., de Boier, H., Nuijens, JH N-terminální úsek Arg2, Arg3, Arg4 a Arg5 lidského laktoferinu je nezbytný pro vazbu na heparin, bakteriální lipopolysacharid, lidský lysozym a DNA. (1997) Biochem. J., 328, 145-151.
34. ↑ Okamoto, T., Tanida, T., Wei, B., Ueta, E., Yamamoto, T., Osaki, T. Regulace plísňové infekce kombinací amfotericinu B a peptidu 2, peptidu laktoferinu, který aktivuje neutrofily . (2004) Clin. Diagn. Laboratoř. Immunol., 11(6), 1111-1119.
35. ↑ Takakura, N., Wakabayashi, H., Ishibashi, H., Teraguchi, S., Tamura, Y., Yamaguchi, H., Abe, S. Orální laktoferinová léčba experimentální orální kandidózy u myší. (2003) Antimicrob. Agents Chemother., 47(8), 2619-2623.
36. ↑ Masci, JR Kompletní odpověď těžké, refrakterní orální kandidózy na ústní vodu obsahující laktoferin a lysozym. (2000) AIDS, 14(15), 2403-2404.
37. ↑ Kuipers, ME, de Vries, HG, Eikelboom, MC, Meijer, DK, Swart, PJ Synergické fungistatické účinky laktoferinu v kombinaci s antimykotiky proti klinickým izolátům Candida. (1999) Antimicrob. Agents Chemother., 43(11), 2635-2641.
38. ↑ Kanyshkova, TG, Semenov, DV, Buneva, VN, Nevinsky, GA Laktoferin lidského mléka váže dvě molekuly DNA s různou afinitou. (1999) FEBS Lett., 451, 235-237.
39. ↑ Rosenmund, A., Kuyas, C., Haeberli, A. Poškození lidského laktoferinu oxidací radiojodací. (1986) Biochem. J., 240, 239-245.
40. ↑ Devi, AS, Das, MR, Pandit, MW Laktoferin obsahuje strukturní motivy ribonukleázy. (1994) Biochim. Biophys. Acta, 1205(2), 275-281.
41. ↑ McCormick, JJ, Larson, LJ, Rich, MA Inhibice aktivity reverzní transkriptázy RNázy v lidském mléce. (1974) Nature, 251, 737-740.
42. ↑ Das, MR, Padhy, LC, Koshy, R., Sirsat, SM, Rich, MA Vzorky lidského mléka z různých etnických skupin obsahují RNázu, která inhibuje, a plazmatickou membránu, která stimuluje reverzní transkripci. (1976) Nature, 262, 802-805.
43. ↑ 1 2 3 4 5 Babina, S. E. Laktoferin jako polyfunkční hydroláza lidského mléka (2006) Disertační práce pro akademickou soutěž. Umění. cand. chem. vědy, Novosibirsk.
44. ↑ Kanyshkova, T. G. Nukleázové aktivity protilátek a laktoferinu v lidském mléce (1999) Disertační práce pro studii. Umění. cand. chem. vědy, Novosibirsk.
45. ↑ Lohman, T.M. Kinetika interakcí protein-nukleová kyselina: využití účinků soli ke zkoumání mechanismů interakce. (1986) CRC Crit. Rev. Biochem., 19(3), 191-245.
46. ↑ Yuan, R. Struktura a mechanismus multifunkčních restrikčních endonukleáz. (1981) Anna. Rev. Biochem., 50, 285-319.
47. ↑ Svensson, B. Proteinové inženýrství v rodině alfa-amyláz: katalytický mechanismus, substrátová specifita a stabilita. (1994) Plant. Mol. Biol., 25, 141-157
48. ↑ Savel'ev, AN, Kanyshkova, TG, Kulminskaya, AA, Buneva, VN, Eneyskaya, EV, Filatov, MV, Nevinsky, GA, Neustroev, KN Amylolytická aktivita IgG a sIgA imunoglobulinů z lidského mléka. (2001) Clin. Chim. Acta., 314(1-2), 141-152.
49. ↑ 1 2 Jing-Fen Kang, Xiang-Long Li Kontaktní informace, Rong-Yan Zhou, Lan-Hui Li, Fu-Jun Feng a Xiu-Li Guo. Bioinformatická analýza genu laktoferinu pro několik druhů  // Biochemická genetika. - 2008. - T. 46 , č. 5-6 . - S. 312-322 .
50. ↑ Seyfert HM, Tuckoricz A, Interthal H, Koczan D, Hobom G. Struktura genu kódujícího bovinní laktoferin a jeho promotor  // Gen. - 1994. - T. 143 , č. 2 . - S. 265-9 .
51. ↑ O'Halloran F, Bahar B, Buckley F, O'Sullivan O, Sweeney T, Giblin L. Charakterizace jednonukleotidových polymorfismů identifikovaných v sekvencích genu bovinního laktoferinu napříč řadou plemen dojnic // Biochimie. - 2009. - T. 91 , č. 1 . - S. 68-75 .
52. ↑ Liao Y, Lopez V, Shafizadeh TB, Halsted CH, Lönnerdal B. Klonování prasečího homologu lidského receptoru laktoferinu: exprese a lokalizace během intestinálního zrání u selat  // Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. - 2007. - T. 148 , č. 3 . - S. 584-90 .