ShRNA

Malé vlásenkové RNA nebo shRNA ( krátká vlásenková RNA, malá vlásenková RNA, krátká vlásenková RNA ) jsou krátké molekuly ribonukleové kyseliny , které tvoří husté vlásenky (struktury stonku a smyčky) v sekundární struktuře .  ShRNA lze použít k potlačení genové exprese prostřednictvím interference RNA . Krátké vlásenkové RNA jsou zavedeny do buněk pomocí vektorů , ve kterých jsou jejich kódující sekvence pod kontrolou konstitutivně aktivních (jako je U6) nebo indukovatelných promotorů . Takové vektory obvykle obsahují nukleotidové sekvence, které jim umožňují integrovat se do buněčného genomu a tím zajistit dědičnou supresi exprese cílového genu [1] .

Malé vlásenky tvořící RNA jsou transkribovány RNA polymerázou III . Tvorba shRNA v savčích buňkách někdy spouští interferonovou reakci k ochraně buňky, jako v případě virového útoku. Takové procesy nejsou pozorovány v případě miRNA ( miRNA ), které jsou transkribovány RNA polymerázou II [2] .

Po dokončení transkripce jsou malé vlásenkové RNA štěpeny buněčnými enzymy za vzniku malých interferujících RNA ( siRNA ) .  Malé interferující RNA jsou součástí RNA-indukovaného komplexu vypnutí genů (RISC). Tento komplex se váže na mRNA , které jsou komplementární k siRNA , a štěpí je.

Malé vlásenkové RNA se také používají v rostlinách. V tomto případě se tradičně používá  konstitutivně aktivní promotor CaMV35S z promotoru 35S viru mozaiky květáku [ 3 ] .

Poznámky

1. ↑ Paddison P., Caudy A., Bernstein E., Hannon G., Conklin D. Short hairpin RNAs (shRNAs) indukují sekvenčně specifické umlčování v savčích buňkách  // Genes Dev  .  : deník. - 2002. - Sv. 16 , č. 8 . - S. 948-958 . - doi : 10.1101/gad.981002 . — PMID 11959843 .
2. ↑ Cao W., Hunter R., Strnatka D., McQueen C., Erickson R. DNA konstrukty navržené k produkci krátkých vlásenkových, interferujících RNA u transgenních myší někdy vykazují časnou letalitu a interferonovou odpověď  //  J. Appl. Genet. : deník. - 2005. - Sv. 46 , č. 2 . - str. 217-225 . — PMID 15876690 .
3. ↑ McIntyre G., Fanning G. Návrh a klonovací strategie pro konstrukci expresních vektorů shRNA  //  BMC Biotechnol. : deník. - 2006. - Sv. 6 . — P. 1 . - doi : 10.1186/1472-6750-6-1 . — PMID 16396676 .  (nedostupný odkaz)